Pyruvat-Produktion durch acetatauxotrophe - JUWEL ...

ERGEBNISSE 75
von y-Aminobutyrat durch die Glutamat-Decarboxylasen A und B induziert werden .
Allerdings wurde kein erhöhter RNA-Level von gabT gemessen, das für die y-Aminobutyrat-
Aminotransferase kodiert, die y-Aminobutyrat und a-Ketoglutarat zu Succinat-Semialdehyd
und Glutamat umsetzt . Das gabT-Gen liegt unmittelbar unterhalb von gabD . Die erhöhte
Expression von tktB könnte für eine erhöhte Aktivität des Pentosephosphat-Wegs sprechen,
allerdings zeigten auch in diesem Fall die anderen Gene dieses Wegs keine erhöhten RNA-
Level . Eine dritte Gruppe von Genen mit erhöhtem RNA-Level im Pyruvat-Produzenten
YYC202-pBR322 kodierte für Transkriptionsregulatoren bzw. Signaltransduktionsproteine,
nämlich AppY, die Sensorkinase BasS, MprA, sowie das bei den Säurestress-Genen bereits
beschriebene YhiE-Protein . AppY induziert u .a . die Expression der Gene für eine saure
Phosphatase sowie für eine putative terminale Oxidase vom Cytochrom-bd-Typ, allerdings
zeigten diese Gene keinen erhöhten RNA-Level . MprA fungiert als Repressor der emrAB-
Gene, kodierend für einen Multidrug-Exporter, die allerdings keinen erniedrigten RNA-Level
zeigten . Die Funktion des Zweikomponenten-Systems, bestehend aus der Sensorkinase BasS
und BasR, ist bisher noch nicht im Detail bekannt. Eine fünfte Gruppe von Genen (artM,
mtlA, ybgH und sstT) mit erhöhtem RNA-Level in YYC202-pBR322 kodierte für Transporter .
Da nur dieser Stamm Pyruvat bildete, nicht aber der Vergleichsstamm YYC202-pGS87,
könnten darunter Gene für den Pyruvat-Importer und/oder einen hypothetischen Pyruvat-
Exporter sein . SstT wurde vor kurzem als Na+/Serin-Symporter identifiziert (Kim et al ., 2002 ;
Ogawa et al., 1998) . YbgH zeigt Ähnlichkeit zu Transportproteinen aus der H+-abhängigen
Oligopeptid-Transporter-Familie (POT- oder PTR-Familie, TC 2.A .17), insbesondere zu
DtpT aus Lactobaeillus helveticus (Nakajima et al., 1997) . Obwohl aufgrund dieser Daten
anscheinend weder SstT noch YbgH am Pyruvat-Transport beteiligt sind, wäre es doch
sinnvoll, die entsprechenden Gene in YYC202 zu deletieren und den Einfluss auf die Pyruvat-
Bildung zu testen .
Tab . 14 (nächste Seite) : Gene, deren mRNA-Level von E . coli YYC202-pBR322 (Y-pBR322) im
Vergleich zu YYC202-pGS87 (Y-pGS87) mindestens 2,5-fach erhöht bzw . erniedrigt waren . Die RNA
wurde aus exponentiell wachsenden Zellen isoliert, die in Minimalmedium (10 mM Glucose, 2 mM
Acetat) kultiviert wurden . Die Daten stellen die Mittelwerte aus Mehrfach-Bestimmungen dar, wobei
jeweils von separaten Kulturen ausgegangen wurde . Spalte n gibt die Anzahl der Experimente an . DH
= Dehydrogenase