Pyruvat-Produktion durch acetatauxotrophe - JUWEL ...

80 ERGEBNISSE
Die Gengruppe mit erniedrigtem RNA-Level in YYC202 enthielt wie erwartet aceEF, da
diese beiden Gene in YYC202 deletiert sind (0,45 ± 0,17 bzw . 0,15 ± 0,00) . Daneben zeigten
mehrere gat-Gene einen stark erniedrigten RNA-Level in YYC202, auch bei dem
nachfolgend beschriebenen Stammvergleich YYC202-pGS87 vs . MG1655 . Die Proteine, die
durch die gat-Gene kodiert werden, sind für die Aufnahme (via PTS) und Verstoffwechselung
von Galactitol, einem C6-Zuckeralkohol, verantwortlich . Möglicherweise fehlt das gat-
Operon in YYC202 . Dies könnte man durch eine Hybridisierung verdauter chromosomaler
DNA von YYC202 mit dem MG1655-DNA-Chip analysieren . Ähnlich wie die gat-Gene
zeigten auch die pyrBIL-Gene sowohl im Vergleich YYC202 vs . MG1655 als auch im
Vergleich YYC202-pGS87 vs . MG1655 erniedrigte RNA-Level . Da die Aspartat-Carbamoyl-
Transferase (PyrBI) aber an der Pyrimidin-Biosynthese beteiligt ist, erscheint es in diesem
Fall unwahrscheinlich, dass die pyrBI-Gene auf dem Chromosom von YYC202 deletiert sind .
Auffällig war auch die stark reduzierte Expression der Gene aceA (Isocitrat-Lyase) und aceK
(Isocitrat-Dehydrogenase-Kinase/Phosphatase) in YYC202 . Das promotor-proximale aceB-
Gen (Malat-Synthase) des aceBAK-Operons war in keinem der Experimente auswertbar, da
das Signal-zu-Rausch-Verhältnis für die Cy3- und die Cy5-Fluoreszenz in allen Experimenten
kleiner als drei war . Daher wurden die Signale als zu schwach angenommen, um zuverlässig
ausgewertet werden zu können . Da die Gene des aceBAK-Operons aus YYC202 amplifiziert
werden konnten, deutet alles daraufhin, dass der Glyoxylatzyklus in YYC202 stark reduziert
ist . Interessant ist in diesem Zusammenhang, dass auch das glcB-Gen einen reduzierten RNA-
Level aufwies, das für die Malat-Synthase G kodiert, die durch Glycolat und Glyoxylat
induziert wird und ebenso wie die durch aceB kodierte Malat-Synthase A die Umsetzung von
Acetyl-CoA, Glyoxylat und H2O zu L-Malat und CoA katalysiert .
Die Gen-Gruppe mit erhöhtem RNA-Level in YYC202 enthielt mehrere Gene (flgCDEF,
fliC) aus der Flagellen-Biosynthese sowie mehrere Gene (mit unbekannter Funktion) des
yhfSTUVWXYZ-Genclusters (Yhfl' könnte ein Transporter sein) . Das yliB-Gen, das einen 2,7-
fach erhöhten RNA-Level zeigte, ist Bestandteil des ybiK-yliABCDEF-Genclusters . Die
yIiABCD-Gene bilden ein Bindeprotein-abhängiges Transportsystem, wobei YIiB das
periplasmatische Bindeprotein darstellt . Das Gen yliC zeigte ebenfalls einen 2,7-fach erhöhten
RNA-Level, wurde aber aufgrund seines p-Wertes von 0,06 als nicht signifikant verändert
angesehen . Die Gene ybiK und yliD zeigten keine signifikant veränderten mRNA-Level . Das
yliA-Gen war nicht auf dem DNA-Chip vorhanden .
Vom appCBA-Operon zeigten zwei Gene einen erhöhten RNA-Level, appB war nicht
auswertbar . AppC und AppB sind die beiden Untereinheiten einer terminalen Oxidase vom