Pyruvat-Produktion durch acetatauxotrophe - JUWEL ...

72 ERGEBNISSE
wurden die beiden fluoreszenzmarkierten cDNA-Sonden mit DNA-Chips hybridisiert, die
PCR-Produkte von circa 96 % aller 4290 ORF's von E. coli MG1655 trugen .
7 .1 Vergleich der Genexpression von E. coli YYC202-pBR322 (aceEF-) und E. coli
YYC202-pGS87 (aceEF + ) bei Wachstum in Glucose-Minimalmedium mit Acetat
Um den spezifischen Einfluss der Pyruvat-Produktion auf die Genexpression von E. coli
YYC202 zu untersuchen, wurden die mRNA-Menge aller Gene der Stämme YYC202-
pBR322 und YYC202-pGS87 durch Transkriptom-Analyse mit DNA-Microarrays
miteinander verglichen . Das Plasmid pGS87 (Abb . 24), das freundlicherweise von J . R . Guest
(University of Sheffield) zur Verfügung gestellt wurde, ist ein Derivat von pBR322 und
enthält auf einem -10,2 kb HindIII-SalI-Insert die E. coli-Gene aceEF und lpdA für die drei
Untereinheiten des Pyruvat-Dehydrogenase-Komplexes (Spencer & Guest, 1985) . Aufgrund
der Expression dieser Gene war der Stamm YYC202-pGS87 nicht mehr acetatauxotroph
(Abb . 25) und bildete nachweislich auch kein Pyruvat mehr (Abb . 26) . Außerdem enthält das
Insert auch das yacH-Gen, dessen Funktion unbekannt ist und Teile der Gene für die
Aconitase (acnB) und des Pyruvat-Dehydrogenase-Repressors (pdhR) . Um Effekte des
Vektors bei dem Stammvergleich auszuschließen, wurde als Referenz nicht YYC202, sondern
YYC202-pBR322 verwendet, der erwartungsgemäß acetatauxotroph war (Abb . 25) und
Pyruvat bildete (Abb . 26) .
Hind I I I
Abb. 24 : Plasmid pGS87, ein Derivat von Plasmid pBR322 (Bolivar et al., 1977) mit einem -10,2-kb-
Hindlll-Sall-Fragment mit den E. coli-Genen aceEF, lpdA, yacH sowie Teilen der Gene acnB und
pdhR (Spencer & Guest, 1985).