Pyruvat-Produktion durch acetatauxotrophe - JUWEL ...

ERGEBNISSE 49
Nebenprodukte kommen unter anderem Aminosäuren in Betracht, da in dem verwendeten
Medium unter anderem 7,6 mM Ammoniumchlorid vorhanden war, welches als N-Quelle
benutzt werden kann . Die Aminosäure Alanin kann durch eine Aminosäure-Transferase direkt
aus Pyruvat gebildet werden . Untersuchungen der 50-Stunden-Probe (100 mM Glucose),
mittels HPLC und H l-NMR lieferten jedoch widersprüchliche Ergebnisse . HPLC-Analysen
zeigten, dass genau zur selben Retentionszeit wie bei dem verwendeten Alanin-Standard ein
Peak detektiert wurde, der einer Endkonzentration von etwa 5 mM Alanin entsprochen hätte .
Zur Identifizierung weiterer Nebenprodukte wurde dieselbe Probe ebenfalls einer H l-NMR-
Analyse unterzogen . Dabei konnten allerdings keine weiteren Nebenprodukte identifiziert
werden . Außerdem wurde für Alanin kein NMR-Signal detektiert . Eine enzymatische Alanin-
Bestimmung bestätigte, dass kein Alanin gebildet wurde . Durch die Umsetzung von Glucose-
6-Phosphat im Pentosephosphatweg könnte COZ als weiteres Nebenprodukt gebildet werden .
Durch fehlende analytische Messtechniken konnte dieses im Schüttelkolbenversuch nicht
nachgewiesen werden .
Tab . 9 : Vergleich der Kohlenstoff-Bilanzen bei Wachstum von YYC202 in Minimalmedium mit 11 mM
Glucose und 2 mM Acetat bzw . mit 106 mM Glucose und 21 mM Acetat . Der C-Gehalt der Biomasse
wurde wie folgt berechnet : OD600 = 1,4 =-- 0,15 mg C/ml . * Die Angaben für die Zellbildung sind in
mg/ml . Die maximal erreichte OD600 betrug 1 bzw . 1,32 .
11 mM Glucose/2 mM Acetat 106 mM Glucose/21 mM Acetat
mm mmol C Y, mmol C mm mmol C Y, mmol C
Glucose-Verbrauch 10,8 6,5 32,3 19,4
Acetat-Verbrauch 2,0 0,4 6,9(100%) 21,0 4,2 23,6(100%)
Biomasse 0,11 * 0,9 0,13 * l,l
Lactat-Bildung 0,0 0,0 2,2 0,7
Pyruvat-Bildung 15,0 4,5 5,4 (78%) 39,3 11,8 13,6 (58%)
Differenz C 1,5 (22%) 10,0 (42%)