Pyruvat-Produktion durch acetatauxotrophe - JUWEL ...

ERGEBNISSE 59
Komplex) sowie die Inaktivierung von poxB (Pyruvat-Oxidase) und pflB (Pyruvat-Formiat-
Lyase) verantwortlich ist.
E
Û
i
T
0
U
160
140
120
100
80
60
40
20
0
A
0 20 40 60 80 100 0 5 10 15 20 25
Zeit (h) Zeit (h)
Abb . 17 : Vergleich der Umsetzung von Glucose ( " ) zu Pyruvat (A) durch Zellsuspensionen von
YYC202 (A) und YYC2021dhA (B) . In Glucose-Minimalmedium mit Acetat kultivierte Zellen wurden in
0,9 % NaCI gewaschen und in 500 mM MOPS (pH 7,0) mit 100 bzw . 88 mM Glucose zu einer OD600
von 7,4 bzw . 3,1 resuspendiert . Der pH-Wert sank während des Experimentes auf pH 6,3 bzw . 6 . Die
Pyruvat-Ausbeute betrug 1,4 bzw . 1,7 Mol Pyruvat/Mol Glucose . Die Lactat-Bildung ist durch A
gekennzeichnet .
5 Einfluss der Pyruvat-Konzentration auf das Wachstum von MG1655
Bei Fermentationsexperimenten zeigte sich, dass es anscheinend eine obere Grenze von ca .
700 mM für die Pyruvat-Produktion durch E. coli YYC202ldhA gibt . Mögliche Ursachen für
diese Obergrenze könnten beispielsweise ein durch die erhöhte Pyruvat-Konzentration
ausgelöster pyruvatspezifischer Stress und/oder osmotischer Stress sein . Ein durch Pyruvat
ausgelöster Stress könnte dazu führen, dass der bisher nicht verstandene Transport des
Pyruvats ins Medium bei so hohen extrazellulären Konzentrationen nicht mehr möglich ist .
Um herauszufinden, ob hohe Pyruvat-Konzentrationen einen spezifischen Stress für E. coli
darstellen, wurde der Einfluss verschiedener Konzentrationen (10, 50, 100, 250, 500, 750 und
1000 mM) von Na-Pyruvat, K-Pyruvat, NaCI und KCl auf das Wachstum von MG1655 in
M9-Minimalmedium untersucht . Für die Versuche mit NaCI und KCl wurde 50 mM Glycerin