Pyruvat-Produktion durch acetatauxotrophe - JUWEL ...

EINLEITUNG 9
YYC202 (Abb . 5, Georgiou et al., 1987) . Dieser Stamm besitzt eine Deletion der aceEF-Gene
sowie weitere Mutationen in den Genen für die Pyruvat-Oxidase, für die Pyruvat-Formiat-
Lyase und für die Phosphoenolpyruvat-Synthetase (kodiert durch pps), die zum Verlust der
entsprechenden Enzymaktivitäten führen . Aufgrund dieses Genotyps (AaceEF pfl-1 poxB]
pps-4 rpsL zbi:Tn10) sollte E. coli YYC202 Pyruvat nicht mehr zu Acetyl-CoA bzw . Acetat
umsetzen können und bei Wachstum auf Glucose-Minimalmedium Acetat benötigen .
Aufgrund des Transposons Tn10 und einer Mutation des rpsL-Gens ist der Stamm
streptomycin- und tetracyclinresistent, was eine selektive Kultivierung ermöglicht .
aeroh
t1111111as-
kette
NAD +
Glucose
Giykoiyse
%-"- NADH Pvruvat-
2 PEP `
Produktion
2 Pyruvat 10 Pyruvat
aceEF pfl -he poxB
Acetyl-CoA *- Acetat'- Acetat
Acetat-
~uxotrophie
Abb. 5 : Schematische Darstellung der Umsetzung von Glucose durch E. coli YYC202 . Die Enzyme
sind im Text beschrieben .
Nach der Kontrolle der Acetat-Auxotrophie von E. coli YYC202 sollte zunächst eine
Charakterisierung wachsender E. coli YYC202-Zellen hinsichtlich ihrer Pyruvat-
Bildungseigenschaften erfolgen . Bei Wachstum von E. coli auf Glucose-Minimalmedium
werden circa 50 % der verbrauchten Glucose für die Biosynthese von neuem Zellmaterial
verwendet (Holms, 1996) . Eine maximale Pyruvat-Ausbeute von 2 Mol Pyruvat/Mol Glucose
ist also nur mit "ruhenden", nicht-wachsenden Zellen möglich . Daher sollte auch die
Umsetzung von Glucose durch nicht-wachsende, aber metabolisch noch aktive Zellen von
E. coli YYC202 untersucht werden .