Pyruvat-Produktion durch acetatauxotrophe - JUWEL ...

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2 :2
97~'z
66 .4
55h
26,6
M
ERGEBNISSE 99
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Abb . 31 : Coomassie-gefärbte 2D-Gele zur Analyse des Proteinmusters von E. coli YYC2021dhA
während einer Acetat-akkumulierenden Fed-Batch-Fermentation . Hier ist das Proteinmuster 11 h (A,
siehe vorherige Seite) bzw . 36 h (B) nach Start der Fermentation dargestellt (s . Abb . 30) . 300 pg
lösliche Proteine wurden mit IPG-Strips mit einem pH-Gradienten von 4 - 7 isoelektrisch fokussiert und
anschließend durch SDS-PAGE nach Größe aufgetrennt . Die Proteinmuster nach 11, 15 und 36 h (s .
Abb . 30) wurden mit dem Programm ProteomWeaver ausgewertet . Proteine, deren Intensität sich im
Verlauf der Fermentation änderte, sind markiert und wurden anhand ihres Peptidmassenfingerprints
identifiziert (mit Ausnahme von Spot-Nr . 25, 26 und 41) .
Bei der acetatakkumulierenden Fermentation fällt auf, dass sich im Vergleich zur
acetatlimitierenden Fermentation das Proteinmuster im Verlauf der Fermentation wesentlich
stärker veränderte . Bei 53 Proteinen wurden Intensitätsveränderungen im Verlaufe der
Fermentation festgestellt, von denen vier nicht identifiziert werden konnten . 25 Proteine
nahmen im Verlauf der Fermentation ab . 3 Proteine nahmen im Verlauf der Fermentation zu .
Bei 3 Proteinen erhöhte sich die Intensität erst nach der Pyruvat-Produktionsphase . Die
Auswertung der resultierenden Peptidmassenfingerprints (Tab . 21) ergab, dass es sich hierbei
um DnaK, ElaB und Glutamin-Synthetase handelte . Im Gegensatz zur acetatlimitierten
Fermentation, in der die Konzentration an 6-Phosphogluconat-Dehydrogenase stieg, sank sie
in der acetatakkumulierten Fermentation (Tab . 20, 21, 22) . Die Spot-Intensität der