Pyruvat-Produktion durch acetatauxotrophe - JUWEL ...

ERGEBNISSE 45
Acetat-Konzentrationen bis zu 5 mM führten bei MG1655 noch zu einer geringfügigen
Zunahme der End-OD, bei höheren Konzentrationen kam es dagegen zu einer drastischen
Abnahme und bei 50 mM Acetat war das Wachstum praktisch völlig gehemmt .
Demgegenüber war die Zellausbeute von YYC202 ohne Acetat circa 5-fach geringer als die
von MG1655, nahm aber mit steigenden Acetat-Konzentrationen kontinuierlich zu . Bei
50 mM Acetat schließlich erreichte YYC202 die gleiche End-OD, die MG1655 maximal
erreicht hatte (bei 5 mM Acetat) . Höhere Acetat-Konzentrationen bis 200 mM führten dann
wieder zu einer leichten Abnahme der End-OD . Die maximale Wachstumsrate von YYC202
in LB-Medium ohne Acetat war etwa 60 % geringer als die von MG1655 . Während jedoch
bei MG1655 die Wachstumsrate mit steigenden Acetat-Konzentrationen kontinuierlich
abnahm, war bei YYC202 bis zu einer Konzentration von -5 mm Acetat eine Zunahme der
Wachstumsrate zu beobachten, erst bei höheren Konzentrationen kam es dann zu einer
stetigen, langsamen Abnahme der Wachstumsrate . Diese Ergebnisse zeigen, dass der Stamm
YYC202 deutlich resistenter gegenüber Acetat ist als der Stamm MG1655 .
2 Versuche mit wachsenden E. coli YYC202-Kulturen
2 .1 Pyruvat-Bildung durch E. coli YYC202
Zunächst erfolgte eine Charakterisierung aerob wachsender YYC202-Zellen hinsichtlich
ihrer Pyruvat-Bildungseigenschaften . Wie in Abb . 9 gezeigt, produzierte YYC202 bei
Wachstum in M9-Minimalmedium mit 11 mM Glucose und 2 mM Acetat 15 mM Pyruvat .
Die erreichte Pyruvat-Ausbeute von 1,4 Mol Pyruvat/Mol Glucose lag damit deutlich höher
als bei den in der Einleitung beschriebenen liponsäureauxotrophen E. coli-Stämmen, die
lediglich 1,2 Mol Pyruvat/Mol Glucose produzierten (Yokota et al., 1994a ; Yokota et al.,
1994b ; Yokota et al., 1997) . Die Verwendung von PAN-Minimalmedium (Pan et al., 1987)
anstelle von M9-Minimalmedium ergab nahezu identische Resultate, so dass für die weiteren
Versuche M9-Minimalmedium verwendet wurde .