RCGI V31 N63

EVALUACIÓN DE LA ACTIVIDAD PROTEOLÍTICA DE EXTRACTOS CRUDOS DE CHAYA (CNIDOSCOLUS CHAYAMANSA) VARIEDAD MANSA Y PICUDA
El sobrenadante se colectó y mezcló con glicerol en
proporción 9:1, almacenando las muestras a -20°C.
Para determinar la actividad de proteasa, se utilizó el método
de Kunitz (4). Éste método se basa en que la proteólisis de
caseína libera aminoácidos aromáticos o péptidos en la
solución que absorben a 280 nm y no precipitan con ácido
tricloroacético (TCA), por lo que si hay actividad proteolítica
se incrementa la absorbancia. Se mezclaron 30 µg de proteína
total de los extractos con 10 µL de la muestra en glicina 1 M
(pH 9.2) y 225 µL de caseína al 5% en amortiguador de
fosfatos 50 mM (pH 7.4) y agua destilada c.b.p 500 µL. Se
incubaron las muestras a 37 °C durante 1 hora.
Posteriormente se añadieron 700 µL de TCA al 5%, y las
muestras se centrifugaron a 10,000 RPM por 5 minutos y la
absorbancia del sobrenadante se midió a 280 nm. Se
determinó la variación de Abs/min mediante la fórmula
siguiente:
Azules) presentan ligeramente mayor actividad específica de
proteasa que la variedad de la Chaya Picuda (Barras Rojas).
En el caso de la Chaya Mansa con todos los Amortiguador
usados presenta actividad proteolítica. Sin embargo en los
tejidos de hojas de las dos variedades se presenta mayor
actividad a pH alcalinos (pH 9 y 10).
Abs/min = (Absfinal- Absinicial)/(60 min)
Las actividades proteolíticas (en Abs/min) fueron divididas
entre 0.030 mg de proteína añadidos a cada ensayo. Una
unidad de actividad específica Kunitz se define como el
cambio de 0.1 unidades de absorbancia por minuto a 37 ºC
por mg de proteína.
Se hicieron 3 réplicas por cada experimento.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
Al observar las plantas de Chaya variedades Mansa y Picuda
seleccionadas para la colecta de tejido, se observó que la
morfología de los tallos también varió considerablemente
entre variedades. Los tallos de Chaya variedad Picuda
tuvieron peciolos más largos y con espinas abundantes (20-
25 cm, Figura 1A), mientras que en Chaya Mansa fueron
cortos y sin espinas prominentes (10-12 cm, Figura 1A). Los
segmentos internodales también son más largos en Chaya
var. Picuda, dando lugar a plantas altas y poco frondosas
(Figura 1B), mientras que las plantas de Chaya var. Mansa
son pequeñas y frondosas (Figura 1C).
Se observó que los tejidos de hoja de ambas variedades tienen
mayor contenido de proteínas en los extractos crudos,
probablemente debido a una mayor actividad metabólica en
este órgano en comparación con aquella en los tallos (Figura
2).
Comparando las dos variedades, se observó que usando
amortiguadores con un pH ligeramente alcalino se pueden
obtener mejores resultados en la extracción. A pesar de ello,
es en la variedad Mansa donde extrajo una mayor cantidad
de proteínas.
En la figura 3 puede notarse la actividad Proteolítica de las
hojas de Chaya Mansa con todos los amortiguadores usados.
Se observó que las hojas de la variedad Chaya Mansa (Barras
Figura 1. Morfología de los peciolos y tallos de las plantas de Chaya: A)
Peciolos de Chaya Mansa y Picuda. Plantas de Chaya B) Picuda y C) Mansa
utilizadas en este estudio.
Figura 2. Contenido de proteína total de los extractos crudos de tejidos de
Chaya Mansa y Picuda. La tabla muestra los valores del contenido de
proteína total en mg/mL. N.D. No detectado.
Comparando las dos variedades, se observó que usando
amortiguadores con un pH ligeramente alcalino se pueden
obtener mejores resultados en la extracción. A pesar de ello,
es en la variedad Mansa donde extrajo una mayor cantidad
de proteínas.
REVISTA DEL CENTRO DE GRADUADOS E INVESTIGACIÓN. INSTITUTO TECNOLÓGICO MÉRIDA Vol. 31 NÚM. 63 109