RCGI V31 N63

MADURACIÓN Y GERMINACIÓN IN VITRO DE EMBRIONES SOMÁTICOS DE BANANO CV. ENANO GIGANTE.
sido evaluado en el cv. Enano Gigante. Con base en lo
anterior, el objetivo de este trabajo fue evaluar medios de
cultivo para optimizar las fases de maduración y germinación
del cv. Enano Gigante de banano.
MATERIAL Y MÉTODOS
Se emplearon callos embriogénicos del cv. Enano Gigante,
los cuales se caracterizaron por ser de color blanco-cremoso
con expresión de pequeños embriones somáticos. Con la
finalidad de determinar el medio de cultivo adecuado para la
maduración en cuanto al uso de reguladores del crecimiento,
se llevó a cabo un primer experimento en el cual se evaluaron
el efecto de la adición a un medio de MS 1 µM de AIA y 1
µM de BA, el medio testigo fue las sales básicas de
Murashige y Skoog (1962), vitaminas de Morel (Morel y
Wetmore 1951), suplementados con 200 mg L -1 de KH 2 PO 4
y ajustado a un pH de 5.8 previo a la esterilización. En esta
etapa se contaron con cinco repeticiones por tratamiento y
una repetición consistió en 10 mg de callo embriogénico,
sembrados en 25 mL de medio de cultivo. Las condiciones
de cultivo fueron en oscuridad a 27 ± 2 °C. A los 60 días de
cultivo se evaluaron el peso fresco (mg), número total de
embriones, porcentaje de embriones maduros y porcentaje de
embriones inmaduros. Para la fase de maduración se llevó a
cabo un experimento en el cual se evaluaron concentraciones
del ácido 3-indolácetico (AIA) y de benciladenina (BA) en el
medio de cultivo. El medio de cultivo base consistió en las
sales y vitaminas de MS suplementados con 87 mM de
sacarosa, 200 mg L -1 de KH 2 PO 4 , gelificado con 3 g L -1 de
gelrite y ajustado a un pH de 5.8 previo a la esterilización.
Los tratamientos utilizados son los descritos en el Cuadro 1.
En esta fase los embriones provenientes de la fase de
maduración se seleccionaron y consideraron embriones
maduros aquellos con coloración blanco-opaca y con
presencia visible de la hendidura cotiledonaria. La variable
evaluada en esta etapa fue el porcentaje de germinación.
Cada tratamiento contó con diez repeticiones, una repetición
consistió en un frasco de 100 mL de capacidad, adicionado
con 25 mL de medio de cultivo y cada frasco inoculado con
diez embriones somáticos maduros. Las condiciones de
cultivo fueron en oscuridad a 27 ± 2 °C durante 8 días y
posteriormente se transfirieron a fotoperiodo (16h:8h, luz:
oscuridad). Los experimentos se establecieron bajo un diseño
completamente al azar y se aplicaron análisis de comparación
de medias con la prueba de Tukey con un nivel de
significancia de 0.05. Todo ello con la ayuda del programa
SAS system 2004 versión 9.0.
Cuadro 1. Tratamientos para la germinación de embriones somáticos del cv.
Enano Gigante.
Tratamientos Benciladenina (µM)
Ácido 3-indolácetico
(µM)
1 0.0 0.00
2 0.0 0.71
3 0.5 0.00
4 0.5 0.71
5 1.0 1.42
6 2.0 2.85
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
En el Cuadro 2 se presentan los resultados sobre el efecto de
la presencia de reguladores del crecimiento en la etapa de
maduración del cv. Enano Gigante. Al evaluar diferentes
parámetros se encontró que la presencia de ellos en el medio
de cultivo sólo incrementa el tamaño de los embriones
somáticos (Fig. 1), en tanto que el porcentaje de embriones
maduros no mostró diferencias significativas, el cual alcanzó
un máximo de 62 % a los 60 días de cultivo. Lo anterior
concuerda con lo obtenido por Enríquez-Valencia (2013)
quien al evaluar el cv., Manzano y el cv. Dátil (AA) obtuvo
porcentajes de embriones maduros por encima del 70 % sin
el uso de RC. Aunque esto difiere a lo sugerido por Cote et
al. (1996) quienes llevaron a cabo la maduración de
embriones somáticos del mismo cv. Enano Gigante en medio
MS adicionado con 1.1 µM ANA, 0.2 µM zeatina, 0.5 µM
kinetina y 0.7 µM 2-iP. Por su parte Navarro et al. (1997)
sugieren el empleo de un medio MS adicionado con 1.1 µM
ANA, 0.4 µM kinetina y 0.2 µM zeatina.
Cuadro 2. Efecto de la presencia de reguladores del crecimiento en el medio
de cultivo en el peso fresco (PF), número total de embriones (NTE),
porcentaje de embriones maduros (PEM) e inmaduros (PEI) durante la
maduración de embriones somáticos del cv. Enano Gigante.
Tratamiento PF (mg) NTE PEM
(%)
PEI
(%)
MS (n = 5) 690 b 354 a 62 a 38 a
MS + 1 µM de AIA + 1 μM 1560 a 281 a 52 a 48 a
de BA (n = 5)
Medias con letras iguales por columna son estadísticamente iguales según
Tukey (P ≤ 0.05).
a
Fig. 1. Embriones somáticos maduros a los 60 d del cv. Enano Gigante;
a) de medio MS y b) de un medio MS + 1 µM de AIA + 1 μM de BA. Barra
= 1 mm.
En la Fig. 2, se pueden observar los resultados del
experimento de germinación del cv. Enano Gigante a los 60
díua después de la siembra. Los resultados sugieren que es
necesaria la presencia de al menos uno de los reguladores del
crecimiento evaluados. Ya que el tratamiento testigo propició
la tasa más baja con 11 %. El tratamiento que propició la tasa
de germinación más alta (32 %) fue el medio compuesto por
MS adicionado con 1.42 µM AIA y 1 µM BA. Lo anterior
supera a los reportados por otros autores al germinar
embriones somáticos del cv. Enano Gigante. Cote et al.
b
52 REVISTA DEL CENTRO DE GRADUADOS E INVESTIGACIÓN. INSTITUTO TECNOLÓGICO MÉRIDA Vol. 31 NÚM. 63