RCGI V31 N63

ANÁLISIS HISTOLÓGICO DEL PROCESO MORFOGÉNICO DE BIXA ORELLANA
de brotes de Bixa orellana. Cada semana se fue realizando un
monitoreo y así como selección del material para procesar
mediante el análisis histológico.
Análisis histológico
Fijación
Primeramente, se colocan las muestras en viales con una
Solución fijadora de F.A.A (etanol 500 mL, ácido acético
glacial 50 mL, formaldehido 100 mL, agua destilada 350
mL). Se infiltra al vacío por 2 días.
Deshidratación
Se realizan lavados con agua destilada estéril dos veces cada
30 minutos, seguidamente se continua con lavados con
concentraciones graduales de etanol (C 2 H 6 O) de 30%,50%
70%,85% y 100% y etanol absoluto. Se infiltra las muestras
con etanol al 70% por dos días, después se continúa con la
concentración de 85% de etanol, etanol al 100% y con etanol
absoluto (CH 3 CH 2 OH).
Inclusión resina
Después de haber sometido las muestras por el proceso de
deshidratación se colocaron en una solución de etanol
absoluto+ resina (Solución JB-4 A Monomer) de JB-4
EMBEDDING KIT relación [1:1]. Posteriormente se
colocaron en la solución JB-4 A Monomer+ Benzoyl
peróxido pasticized (catalyst). Para cada 25 mL de solución.
Se adiciono 1.2 g de catalyst (1.6 mL solución B) para montar
el bloque, que polimeriza el bloque. Se tomó 2 mL de
solución para el montaje de la muestra. Para los cortes
histológicos se utilizó un micrótomo de rotación modelo
Microm HM325.Los cortes histológicos fueron teñidos con
Azul de toluidina, finalmente las muestras quedaron listas
para ser analizadas en in microscopio óptico para la
interpretación de los datos. En la toma de fotografías se usó
un microscopio de Epifluorescencia. AXIOSCOPE A1.
desarrollo de los centros meristemáticos, células que poseen
un citoplasma denso y volumen reducido comparado con las
vacuolas adyacentes Ferreira Da Cruz et al., 2014 (2-C), a su
vez en la figura (2-D) existió una proliferación de las
regiones meristemáticas, que dan lugar a las primeras
estructuras nodulares, la otra micrografía (2-E) muestra el
desarrollo de los haces vasculares de los nuevos vástagos que
se formaron. De esta manera se visualiza que el proceso de
regeneración es de tipo asincrónico por que los nódulos se
forman en diferentes tiempos. En la sección (2-F) las
estructuras del corte transversal se observa la formación de
brotes en diferentes planos del callo a la semana tres de
inducción de brotes.
Figura 1. Cortes histológicos en explantes de hipocótilo de Bixa orellana.:
Azul de toluidina. A) tejido de hipocótilo, A-F Control negativo, B-C: 1
semana de inducción de brotes D) corte transversal del tejido de hipocótilo.
G) sección longitudinal del explante semana 1. H-I: estructuras en
formación, desarrollo de los haces vasculares, e: epidermis x: xilema, fl:
floema hv: haces vasculares.
RESULTADOS Y DISCUSION
En el laboratorio, el proceso de inducción de brotes se logra
con el empleo de BA a una concentración de 4.4 µM que
origina brotes a partir de hipocótilo de Bixa orellana, el
proceso de desdiferenciación ocurre en la sección donde se
realizó el daño mecánico en la primera semana de inducción
Figura 1 (B-C), que respecto al control las células se
observan normales en el tejido; solo se observa la epidermis
y el has vascular del tejido figura 1 (A). La figura D muestra
la sección trasversal de la primera semana de inducción. Para
la semana 2 se logró visualizar en el tejido la formación de
los haces vasculares de los nuevos brotes que se conforman
al tejido madre figura 1 (H-I).
A la segunda semana de inducción en el análisis histológico
se identificó la peridermis predispuesta para comenzar la
formación de los haces vasculares y la formación de brotes
en el explante figura 2 (A), la micrografía 2-(B) muestra la
diferenciación de los haces vasculares al principio de su
formación; al mismo tiempo el callo comienza con el
Figura 2. Cortes histológicos en explantes de hipocótilo de Bixa orellana.:
Azul de toluidina. A) Desarrollo de la peridermis en callos a las dos semanas
de la formación de brotes, B) etapa temprana de la formación de haces
vasculares semana 2, C) Formación de los centros meristemáticos a la
semana tres de la inducción, D) desarrollo de las primeras estructuras, E)
vascularización en diversas etapas, F) Desarrollo de las estructuras corte
transversal. Semana tres de inducción de brotes.
A la semana tres de la inducción de brotes se comienzan a
desarrollar también los sitios meristemáticos, se logró
visualizar el crecimiento de los haces vasculares en diferentes
tiempos de desarrollo; dando como resultado la formación de
los nuevos brotes al mismo tiempo el crecimiento de los
mismos (3-A), en el corte longitudinal del callo se aprecia
que los brotes se desarrollan al principio del sitio de corte (3-
REVISTA DEL CENTRO DE GRADUADOS E INVESTIGACIÓN. INSTITUTO TECNOLÓGICO MÉRIDA Vol. 31 NÚM. 63 63