RCGI V31 N63

BÚSQUEDA DE NUEVOS COMPUESTOS BIO-ACTIVOS CONTRA EL PATÓGENO OPORTUNISTA CANDIDA ALBICANS ATCC10231
Con base en lo antes expuesto, el objetivo de este trabajo es
buscar nuevos compuestos producidos por actinobacterias
nativas del suelo contra el patógeno oportunista Candida
albicans.
MATERIAL Y MÉTODOS
Se realizó una búsqueda de actinobacterias con actividad
anti fúngica contra Candida albicans ATCC10231 a través
de la formación de halos de inhibición utilizando bloques de
agar obtenido de un cultivo con la cepa en crecimiento. Se
probaron 30 colonias diferentes, de las cuales se obtuvo una
colonia con actividad anti-fúngica. La colonia identificada se
nombró como GCAL25, la cual fue caracterizada e
identificada mediante el gen ribosomal 16S. Una vez
amplificado el gen, se purificó y se mandó secuenciar. La
secuencia se analizó utilizando el programa CLC Main
Workbench 7 y BLAST. El árbol filógenetico se realizó el
programa Phylogeny.fr. Los ensayos de producción del
metabolito bioactivo sólo se obtuvieron de crecimiento en
medio sólido, por lo que se crecieron en medio sólido ISP2,
durante dos semanas a 29°C. La obtención del metabolito
bioactivo se realizó a través de la maceración del cultivo
sólido (agar) e incubando con etanol absoluto a 4°C toda la
noche, al día siguiente se filtró el extracto, se centrifugó y se
recuperó al sobrenadante el cual se concentró evaporando a
45°C durante 48 horas. Una vez obtenido el compuesto, se
realizó un ensayo de concentración mínimia inhibitoria
(MIC) del extracto bioactivo producido por la cepa sobre
Candida albicans ATCC10231. Posteriormente se evaluó el
efecto del extracto bioactivo contra Candida albicans
ATCC10231 y se observó al microscopio óptico.
RESULTADOS
De análisis de 30 actinobacterias se obtuvo una colonia con
actividad contra Candida albicans ATCC10231, como se
puede observar en la figura 1.
Figura 1. Efecto de compuesto secretado por Actinobacterias al medio de
cultivo sobre Candida albicans ATCC10231
Una vez realizada la extracción del ADN y hecho el PCR, se
secuenció la subunidad 16S; el análisis de la secuencia
reveló que la cepa pertenece al género Streptomyces, por lo
que se nombró Streptomyces sp. cepa GCAL-25. Al realizar
el árbol filogenético, como se observa en la figura 2, se
observó que la cepa está alejada de cepas productoras de
metabolitos secundarios muy bien caracterizadas como lo es
Streptomyces coelicolor.
Figura 2. Árbol filogenético que muestra las relaciones evolutivas de
Streptomyces sp. cepa GCAL-25 entre bacterias del género Streptomyces
spp.
La cepa Streptomyces sp. cepa GCAL-25 es cercana a
Streptomyces griseocarneus, de la cual el primer reporte
corresponde a la producción de hidroxiestreptomicina (11) y
actualmente se ha reportado la expresión de la
sphingomyelinase C por parte de esta cepa (12, 13). No
existen reportes de la producción de metabolitos secundarios
en las cepas cercanas. Como ha sido reportado ampliamente
(14), la producción de los diversos metabolitos por parte de
las actinobacterias, depende en mucho de las condiciones de
crecimiento como el tipo de medio de cultivo, factores tales
como crecimiento en sólido o líquido, la temperatura, el pH,
entre otros. Puesto que es más fácil obtener y purificar los
compuestos de medio líquido, se evaluó la capacidad de
Streptomyces sp. cepa GCAL-25 de producir el compuesto
antifúngico en el medio líquido ISP2, los resultados
obtenidos muestran que no hay producción de compuestos
bioactivos contra Candida albicans ATCC10231. De ahí que
se realizó la extracción de compuestos a partir de un cultivo
crecido en placas de agar. Una vez obtenido el extracto
bioactivo de las placas de agar, se determinó la concentración
mínima inhibitoria contra Candida albicans ATCC10231
(cuadro I). El resultado revela un efecto fungicida, parecido
a la anfotericina B, más que fungistático (Itraconazol) donde
hubo crecimiento de Candida albicans ATCC10231 en todas
las concentraciones.
REVISTA DEL CENTRO DE GRADUADOS E INVESTIGACIÓN. INSTITUTO TECNOLÓGICO MÉRIDA Vol. 31 NÚM. 63 79