RCGI V31 N63

ANÁLISIS DE DIFERENTES SUSTRATOS EN LA GERMINACIÓN Y MULTIPLICACIÓN IN VITRO DE ORQUÍDEAS SILVESTRES DEL ESTADO DE CAMPECHE
problema de reproducción de estas especies, por lo que solo
un 4% de las semillas de orquídeas liberadas al ambiente
llegan a germinar, y de éstas, muy pocas llegan a la etapa
adulta (McKendrick, 2000).
Dado lo anterior, muchas especies de orquídeas se
encuentran en la actualidad en algún estatus de conservación
y en peligro de extinción, ya que sus exóticas flores las
vuelven objetivo de depredadores furtivos. Por lo tanto, es
necesario el desarrollo de estrategias dirigidas hacia la
preservación de germoplasmas de estas especies.
La propagación in vitro es una alternativa viable para
aumentar el porcentaje de germinación de estas plantas hasta
en un 70% (Vejsadová, 2006) obteniéndose plantas sanas,
libres de plagas y enfermedades y vigorosas, además de que
de esta forma es posible optimizar su tasa de crecimiento.
Por tanto, el objetivo del presente proyecto es desarrollar un
método de propagación in vitro para orquídeas nativas del
Estado de Campeche que posibilite la obtención de un mayor
porcentaje de germinación y desarrollo de protocormos y
plántulas. Dichas especies fueron Catasetum integerrimum,
Brassabola nodosa, Prostechea bootiana y Rhincholaelia
digbiana. Hasta el momento, sólo se ha tenido éxito en el
establecimiento del cultivo in vitro de dos de estas especies:
Catasetum integerrimum y Brassabola nodosa, por lo que en
la actualidad se está trabajando en el establecimiento de las
condiciones para la germinación de las dos especies
restantes.
Los resultados obtenidos en este estudio posibilitarán la
obtención de un banco de germoplasma de estas especies y el
desarrollo de estrategias experimentales para la conservación
de otras especies de orquídeas de interés.
MATERIAL Y MÉTODOS
Se colectaron cápsulas de las cuatro especies a través de
recorridos en viveros, centros de recolección, a través de
coleccionistas y salidas de campo. El material así obtenido
fue trasladado al laboratorio, realizándose una evaluación de
su madurez, para proceder en su caso a retirar las semillas
para la siembra, previa desinfección de las cápsulas con
hipoclorito de sodio al 8%, por 20 minutos, en agitación
continua. Las cápsulas inmaduras fueron colocadas a TA
hasta su maduración y obtención de las semillas.
Los ensayos dirigidos a incrementar el porcentaje de
germinación se realizaron empleando medio de cultivo
Murashige y Skoog (MS) con sacarosa al 3% (Flores et al.,
2008) y MS adicionado con BAP al 2%. Para optimizar el
desarrollo de protocormos a plántulas, se empleó como base
el medio de cultivo MS adicionado con sacarosa al 3%,
evaluándose el efecto de tres nutrientes orgánicos, agua de
coco (125 ml/L), pulpa de tomate (40 g/L), plátano (100 g/L),
y una mezcla de pulpa de plátano y tomate (40/100 g/L) . Los
resultados así obtenidos fueron comparados con los
observados utilizando un medio de cultivo comercial
diseñado para el cultivo de orquídea Phytamax (Sigma, Cat.
No. P6793-10L). Adicionalmente, se probó el fitorregulador
AIA (5 mg/L), así como carbón activado (5 g/L) sobre el
incremento en la biomasa de las plántulas. Cabe señalar que
la siembra de las semillas, dado su pequeño tamaño, fue
realizada en estriado con asa bacteriológica. Todos los
cultivos fueron incubados a 26 °C y condiciones de luz
continua.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
Al observar el porcentaje de germinación y desarrollo de
protocormos, después de 5 meses de siembra en medio MS
adicionado con sacarosa al 3% (medio base), se obtuvo que
este medio no producía una respuesta observable (Figura 1),
por lo que se decidió adicionarle fitorreguladores.
Al comparar el porcentaje de germinación obtenido con
medio MS adicionado con BAP al 2%, se observó que
únicamente las especies Catasetum integerrimum y
Brassabola nodosa respondieron al tratamiento, con
porcentajes de germinación del alrededor del 70%. Lo
anterior concuerda con los resultados obtenidos por
Vejsadová (2006) y García I. (2012) con especies de
orquídeas terrestres y epifitas (Figura 2).
Del análisis de los resultados obtenidos al probar diferentes
nutrientes orgánicos adicionado al medio base (MS +
Sacarosa 3%), se obtuvo que el carbón activado indujo a un
crecimiento acelerado de hojas y raíces (Figura 3F), seguido
del medio adicionado con pulpa de plátano (Figura 3E) y la
mezcla de pulpas de tomate y plátano (Figura 3D).
Resultados similares se obtuvieron por Obaidul et al., 2015
al utilizar una concentración de 60 mg/L de extractos de
banana para el cultivo de Dendrobium sp. Asimismo, Flores
et al., (2008) describió que la pulpa de tomate, el agua de
coco y plátano en cultivo de Oncidium stramineum da
resultados favorables en el desarrollo de la planta y en la
germinación de la misma. Finalmente Luciano Moraes y
Ricardo Tadeu (2005), obtuvo en sus experimentos que el uso
de carbón activado en una concentración de 2 g/l resultados
parecidos al nuestro al aplicarse al medio de cultivo de las
especies brasileñas Laelia flava, Miltonia flavescens,
Oncidium trulliferum.
Cabe resaltar que, en todos los casos, se obtuvo una
diferencia notable en la velocidad de crecimiento y en la
acumulación de biomasa al compararse las plántulas
cultivadas en medio base con nutrientes orgánicos, carbón
activado con fitorreguladores con las cultivadas en el medio
Phytamax (Figura 3A). Estos resultados contrastan con los
obtenidos Martin and Joseph Madassery (2005) y Muthu
Thiruvengadam and Chang-Hsien Yang (2009), quienes
reportaron los efectos positivos de este medio comercial en
el crecimiento de orquídeas.
REVISTA DEL CENTRO DE GRADUADOS E INVESTIGACIÓN. INSTITUTO TECNOLÓGICO MÉRIDA Vol. 31 NÚM. 63 29