RCGI V31 N63

PROCESO DE GENERACIÓN CELULAR Y DESARROLLO MORFOLÓGICO IN VITRO DE LA PLANTA MEDICINAL ALOE VERA
triacilglicéridos, aminoácidos, trazas de alcaloides, vitaminas
y diversos materiales (Reynolds, 2004), de esta manera la
planta está constituida por una mezcla compleja de
compuestos, donde más de 20 de las sustancias poseen
actividades benéficas para la salud (Pritam et al., 2007).
El Aloe vera representa una fuente importante de ingresos ya
sea a nivel familiar o empresarial, ésta última alternativa se
hace en base a grandes plantaciones y complejos
agroindustriales que procesan y transforman los distintos
subproductos obtenidos a partir de las hojas, como pueden
ser: jugos concentrados, polvo o gel, los cuales a su vez son
para distintos propósitos (Sánchez-Robles, 2002). El valor
que puede remunerar está basado en las cotizaciones altas de
los productos elaborados a base de la hoja, lo que ha
provocado emporios empresariales que impactan el mercado
nacional e internacional, constituyendo una de las especies
de mayor importancia en nuestro país, sin embargo, el cultivo
de esta planta ha experimentado pobres rendimientos debido
a que la velocidad de propagación es muy lenta para poder
llevarla a una escala comercial, por lo cual las empresas han
buscado alternativas para poder hacerle frente a este
problema, el cultivo de tejidos se ha convertido en una de las
opciones tecnológicas más utilizadas, para poder conseguir
una propagación clonal rápida, además de que el cultivo de
callos puede ser una alternativa para la obtención de algunos
de estos metabolitos secundarios lo que podría permitir la
producción a gran escala de dichos compuestos que presentan
gran actividad biológica por lo cual el presente estudio
pretende implementar una metodología eficiente para el
cultivo in vitro de Aloe vera
MATERIAL Y MÉTODOS
Material biológico: Se obtuvieron los explantes a partir de
plantas de Aloe vera de 20 cm de altura, las cuales fueron
previamente sometidas a un proceso de descontaminación de
dos fases, la primera consistió en un lavado en área no estéril
con agua corriente de la llave para eliminar los residuos de
tierra de las plantas completas. Posteriormente se
sumergieron en una solución de hipoclorito de sodio al 30%,
agregándole 6 gramos de detergente comercial en polvo por
litro de solución durante un tiempo de 6 minutos y se
enjuagaron con agua corriente. Este proceso se aplicó por tres
ocasiones. En seguida se separaron los tallos de las hojas con
la ayuda de un bisturí y se colocaron sobre toallas de papel
hasta completar el escurrimiento del acíbar de las hojas y
tallos de la planta de aloe. La segunda fase de
descontaminación se realizó en área estéril, consistió en
manejar por separado a tallos y hojas, sumergiéndolos en una
solución de hipoclorito de sodio al 30% adicionado con 10
gotas de Tween 80 por cada litro de solución, por un tiempo
de 15 minutos en agitación constante. Las hojas y tallos
fueron enjuagadas con agua estéril y se aplicó todo este
segundo proceso por dos ocasiones más. Se obtuvieron los
explantes de los tallos seccionando estos transversalmente de
4 mm de grosor aproximadamente y 1 cm de diámetro. De
las hojas se obtuvieron las bases de estas y se seccionaron
para obtener tejido de 1cm 2 de área. Los explantes obtenidos
fueron inoculados en los diferentes medios de cultivo
probados, con distintas concentraciones de hormonas.
Medios de cultivo: Se utilizó como medio base el de
Murashige y Skoog (1962) (MS) a la mitad de su fuerza
adicionándosele diversas concentraciones de las hormonas
vegetales 6-Bencil-aminopurina (BAP), Acido Indolacetico
(AIA) y Acido Naftalenacetico (ANA) como se observa en
la Tabla 1. El medio control consistió en el MS sin hormonas.
En todos los casos a los medios se les adicionó: Myo-inositol,
100mg/l; Tiamina, 4mg/l; Cisteína hidroclórica, 25mg/l;
Sacarosa, 30g/l y como agente gelificante se utilizó gelrite,
2g/l. El pH de los medios de cultivo fue ajustado a 6.0 antes
de la esterilización. La esterilización de los medios se realizó
con ayuda de una autoclave a temperatura de 121°C, presión
de 1.02 Kg/cm 2 por 15 minutos.
Los tratamientos fueron realizados por triplicado. Los
cultivos fueron incubados en fotoperiodo de 16 horas luz,
temperatura de 27 ± 2 °C.
Los parámetros a evaluar fueron: Descontaminación,
respuesta organogénica y/o callogénica de los explantes
(base de hoja y tallo).
Tabla 1 Combinación de los reguladores de crecimiento utilizados en los
medios de cultivo para los explantes de Aloe Vera
Tratamiento Hormona Concentración
(mg/l)
Hormona Concentración
(mg/l)
1 ANA ANA 0.5 BAP 2.5
2 ANA ANA 0.1 BAP 1
3 ANA ANA 0.1 BAP 4
4 ANA ANA 0.9 BAP 1
5 ANA ANA 0.9 BAP 4
1 - - - -
2 AIA 0.5 BAP 2.5
3 AIA 0.1 BAP 1
4 AIA 0.1 BAP 4
5 AIA 0.9 BAP 1
6 AIA 0.9 BAP 4
RESULTADOS Y DISCUSIÓN.
Se evaluó el resultado del proceso de descontaminación de
tallos y hojas de Aloe vera encontrándose como resultado el
75% de explantes sanos lo cual permitió continuar con estos
explantes sanos para evaluar la respuesta al cultivo in vitro.
En cuanto a la respuesta callogénica los explantes de base de
hoja cultivados presentaron la formación de callo en todos
los medios que contenían hormonas, no así en el caso del
medio de cultivo número 1 (medio control) el cual carecía de
estas. Se pudo apreciar que en los lugares de corte del
explante se presentó crecimiento de callo. En cuanto al
tiempo de formación y crecimiento del callo, el explante tuvo
una fase de adaptación de aproximadamente 5 días, a los 9
días todos los explantes manifestaron presencia de callo y a
partir del día 15 el crecimiento fue de manera exponencial
hasta llegar a los 54 días que fue el tiempo en que se evaluó
REVISTA DEL CENTRO DE GRADUADOS E INVESTIGACIÓN. INSTITUTO TECNOLÓGICO MÉRIDA Vol. 31 NÚM. 63 49