RCGI V31 N63

ARTÍCULO DE INVESTIGACIÓN BIOTECNOLOGÍA MÉDICA Y FARMACÉUTICA
REVISTA DEL CENTRO DE GRADUADOS E INVESTIGACIÓN. INSTITUTO TECNOLÓGICO DE MÉRIDA. Vol. 31 NÚM. 63. PP. 75 – 77 OCT. 2016 ISSN 0185-6294
ESTABLECIMIENTO DE UN CULTIVO PRIMARIO A PARTIR DE LA PULPA DENTAL HUMANA COMO
MODELO DE ESTUDIO PARA LA DIFERENCIACIÓN CELULAR
Melissa Dianela Mercado-Rubio, Ángel Gabriel Rivas-Aguayo, Cristina de Fátima González López, Ricardo Peñaloza
Cuevas, María Claudia Villicaña Torres*, Geovanny Nic Can* y Beatriz Adriana Rodas Junco *.
Facultad de Ingeniería Química, Universidad Autónoma de Yucatán. Periférico Norte Kilómetro 33.5, Tablaje Catastral 13615, Chuburná de Hidalgo Inn,
C.P. 97203 Mérida, Yucatán. *Cátedras-CONACYT.
Autor de contacto: beatriz.rodas@correo.uady.mx; geovanny.nic@correo.uady.mx
Recibido: 30/agosto/2016 Aceptado: 29/septiembre/2016 Publicado: 19/octubre/2016
RESUMEN
Numerosos estudios avalan el potencial de las células madre en la medicina regenerativa y la ingeniería tisular. Actualmente,
estas células pueden ser obtenidas a partir de la pulpa dental humana. Dicho tejido, contiene células definidas como células
madre de la pulpa dental (CMPD), las cuales son capaces de diferenciarse en diferentes linajes celulares. El objetivo del
presente estudio fue aislar y cultivar células de la pulpa dental humana a partir de dientes premolares utilizando dos métodos
de aislamiento. Las piezas dentales fueron donadas por pacientes con tratamiento odontológico, previo consentimiento
informado. Una vez extraída la pulpa dental, ésta fue tratada a través de dos métodos previo al inicio del cultivo celular. En
el primer método, el tejido pulpar fue disgregado mecánicamente, y en el segundo, el tejido fue digerido con una solución
enzimática. Posteriormente, las células de ambos tratamientos fueron cultivadas en medio de Cultivo Eagle Modificado de
Dulbecco, suplementado con 10% de suero fetal bovino y una solución de antibióticos [penicilina (100 UI/ml) y
estreptomicina (100 µg/ml)] e incubadas a 37ºC y 5% de CO 2 . Los resultados obtenidos, a excepción de las células cultivadas
por explante, mostraron que las células aisladas mediante digestión enzimática son capaces de formar colonias clonogénicas
después de 4 semanas de cultivo. Las células obtenidas presentaron morfologías alargadas, aplanadas y similares a
fibroblastos. En conclusión, nuestros resultados indican que es posible obtener un cultivo celular primario a partir del tejido
pulpar obtenidas de premolares con características clonogénicas mediante el método de digestión enzimática.
Palabras clave: pulpa dental, cultivo primario, células troncales, diferenciación, multipotente
ABSTRACT
Numerous studies support the potential of stem cells in the area of regenerative medicine and tissue engineering. These cells
can be obtained from human dental pulp. This tissue contains stem cells defined as dental pulp stem cells (DPSCs) which are
able to differentiate into different cell lineages. The aim of this study is to isolate and culture cells from human dental pulp
using two isolation methods. Dental pieces were obtained from patients with orthodontic treatment, prior informed consent.
After dental pulp isolation, this it was treated by two methods before begin of cellular culture. In the first method, the dental
pulp tissue it was mechanically disaggregated, whereas in the second method, pulp tissue it was digested with a
collagenase/dispase solution during 30 or 60 minutes. Thereafter, the cells were cultured in Dulbelcos modified Eagle medium
supplemented with 10% fetal calf serum, an antibiotic solution [penicillin (100 IU / ml) and streptomycin (100 mg/mL)] and
incubated at 37 and 5% CO 2 . The results show that the cells isolated by enzymatic digestion were able of forming clonogenic
colonies after 4 weeks of culture. The obtained cells, unlike seeded explant, presented elongated morphologies, flattened and
fibroblast-like cells. In conclusion, our results show that it is possible obtain a primary culture from dental pulp premolars
with clonogenic characteristics by enzymatic digestion method.
Keywords: Dental Pulp, primary culture, stem cells, differentiation, multipotent
INTRODUCCIÓN
Las células madre adultas son poblaciones de células
desdiferenciadas que se encuentran en regiones específicas
del cuerpo humano durante la mayor parte de nuestra vida.
Estas, son capaces de autorenovarse para mantener la
homeóstasis del tejido y de realizar procesos de regeneración
celular posterior a un daño físico. Este importante hecho, ha
generado investigaciones enfocadas a entender los
mecanismos moleculares y de señalización involucrados en
la autorenovación y la diferenciación celular. Por ejemplo, la
búsqueda de células madre en tejido especifico ha permitido
encontrar diversas poblaciones de este tipo celular en medula
ósea, cordón umbilical, hígado, retina, tendones, tejido
adiposo, placenta, piel y de la pulpa dental humana (Bianco,
2014; Gronthos et al., 2000). Esta última, representa una
interesante fuente de células madre adultas que pueden ser
aisladas a partir de los dientes que se pierden de manera
natural durante la niñez o que son descartados por
indicaciones ortodónticas.
T E C N O L Ó G I C O N A C I O N A L D E M É X I C O . I. T. M É R I D A