RCGI V31 N63

COMUNICACIÓN CORTA BIOTECNOLOGÍA MÉDICA Y FARMACÉUTICA
REVISTA DEL CENTRO DE GRADUADOS E INVESTIGACIÓN. INSTITUTO TECNOLÓGICO DE MÉRIDA. Vol. 31 NÚM. 63. PP. 160 – 160 OCT. 2016 ISSN 0185-6294
IDENTIFICACIÓN DE BIOMARCADORES PARA LA ENFERMEDAD DE CHAGAS EN UN MODELO MURINO DE
VACUNACIÓN
Shineily García-Polanco , Nora Hernández-Cuevas*, Miguel Rosado-Vallado y Eric Dumonteil
* Laboratorio de Parasitología, C.I.R. Universidad Autónoma de Yucatán. Calle 96 S/N x Av. Jacinto Canek y Calle 47.
Paseo de las Fuentes. C.P. 97225, Yucatán, México. Tel: (999) 924-59-10, Fax: (999) 923-61-20
Autor de contacto: nora.hernandez@correo.uady.mx; shineily@hotmail.com
Recibido: 30/agosto/2016 Aceptado: 29/septiembre/2016 Publicado: 19/octubre/2016
Palabras clave: Biomarcador, Fibronectina, Enfermedad de Chagas
INTRODUCCIÓN
La enfermedad de Chagas (EC) es causada por el parásito
Trypanosoma cruzi, el cual es trasmitido al humano a través
del insecto vector conocido como Triatoma dimidiata,
comúnmente llamado “pik” en Yucatán 1 . Los fármacos
utilizados para tratar la EC son el nifurtimox y el
benznidazol, estos presentan efectos secundarios y no son
eficientes en todos los pacientes. La severidad de la
enfermedad y su respuesta al tratamiento podría ser
monitoreada a través de biomarcadores de la EC en sueros o
plasmas de pacientes. Actualmente no se cuenta con un
biomarcador ideal para la EC. En el año 2014 Santamaria y
colaboradores reportaron que un fragmento de la proteína
fibronectina esta aumentado en los pacientes con EC, este
fragmento regresa a niveles normales después del tratamiento
con nifurtimox 2 . El objetivo de este trabajo es medir los
niveles de fibronectina en ratones infectados y no infectados
en muestras de suero y plasma.
1C, se puede apreciar que en los ratones no infectados hay
una mayor señal de FN con respecto a los ratones infectados.
En la figura 1D se muestra la gráfica con la media de los
valores obtenidos en el análisis de densitometría de las
bandas. Por otra parte, las muestras de sueros se migraron en
un gel de poliacrilamida y se observó que estas presentan
degradación, posiblemente desde la obtención de las
muestras. Como se esperaba el ensayo de western blot con
las muestras de sueros de 3 ratones no infectados y 4 ratones
infectados indicó que se detecta FN pero esta se encuentra
degradada. Por lo tanto, la calidad de las muestras no
permitió llevar a cabo el análisis densitométrico como en el
caso de los plasmas.
A B C D
NIF INF NIF INF NIF INF
MATERIAL Y MÉTODOS
Las proteínas en suero/plasma fueron cuantificadas por el
método de Bradford y fueron migradas en un gel de
poliacrilamida, el cual se tiño con azul de Coomassie. Las
proteínas se trasfirieron a una membrana de PVDF, que fue
teñida con rojo de Ponceau para corroborar la integridad de
las muestras, después de los lavados esta membrana se
incubo con el anticuerpo anti-Fibronectina (dilución 1:800) y
con el anti-rabbit (dilución 1:5,000).
RESULTADOS Y DISCUSIÓN.
Las muestras de plasmas obtenidas de 4 ratones infectados
con T. cruzi (que fueron los sobrevivientes de un grupo de 7
animales) y 4 ratones no infectados se migraron en un gel de
poliacrilamida (figura 1A) donde se puede apreciar que las
proteínas se encuentran en buen estado. Posteriormente se
cargaron los volúmenes correspondientes a 20 µg de proteína
y se llevó a cabo un ensayo de Western blot. La transferencia
de las proteínas en la membrana PVDF fue observada al teñir
con rojo de Ponceau (figura 1B). Las bandas
correspondientes a Fibronectina (FN) se observan en la figura
Figura 11.- Detección de los niveles de fibronectina en las muestras
de plasmas de ratones infectados con T. cruzi y ratones no
infectados
CONCLUSIONES.
Las diferencias en los niveles de fibronectina en ratones no
infectados y ratones infectados fue detectada por un ensayo
de western blot, y se pudo notar claramente que los niveles
de esta proteína están disminuidos en ratones infectados. Así,
nuestros resultados sugieren que esta proteína podría ser un
buen biomarcador de la infección por T. cruzi.
BIBLIOGRAFÍA
1. Brener, Z. (1971) Life cycle of Trypanosoma cruzi. Revista do
Instituto de Medicina Tropical de Sao Paulo 13, 171-178.
2. Santamaria, C., et al. (2014) Serum biomarkers predictive of
cure in Chagas disease patients after nifurtimox treatment. BMC
infectious diseases 14, 1.
T E C N O L Ó G I C O N A C I O N A L D E M É X I C O . I. T. M É R I D A