RCGI V31 N63

TRATAMIENTO ENZIMÁTICO Y MICROBIANO DE UN EFLUENTE SINTÉTICO CON FENOLES
MATERIAL Y MÉTODOS
Para el tratamiento microbiano se utilizó micelio de 48 horas.
Se realizó un cultivo en medio YMPG suplementado con el
efluente sintético a concentración final de 50, 250 y 500 M.
El tiempo de tratamiento fue de 72 horas y se muestreó cada
24 horas. Los medios no inoculados se usaron como control.
Se cuantificaron fenoles totales con el reactivo de Folin-
Ciocalteu (Singlenton & Rossi, 1965) y se determinó
actividad de lacasa por espectrofotometría (Coll et al., 1993).
Una unidad de actividad de lacasa es la cantidad de la enzima
que oxida 1 µmol de ABTS/ml/min, bajo las condiciones de
ensayo. La producción de lacasas se realizó con el cultivo del
hongo en medio con salvado de trigo en buffer de fosfatos
pH 6 y 35ºC (Zapata Castillo, 2012). El tratamiento
enzimático del efluente sintético se realizó en tubos de
ensayo a las concentraciones de fenol antes mencionadas y
se adicionaron 500 l del extracto enzimático. El tratamiento
fue durante 72 horas, tomando alícuotas cada 24 horas y se
cuantificaron fenoles totales. Se tomó como control los tubos
de ensayo con la mezcla de fenoles sin el extracto enzimático.
(A)
(B)
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
La figura 1 muestra los resultados del tratamiento de fenoles
durante el cultivo del hongo T. hirsuta. Se observó una
reducción del contenido fenólico en las tres concentraciones
evaluadas. El hongo fue capaz de reducir el 50% de estos
compuestos desde las primeras 24 h del cultivo. En los
extractos libres de células no se detectó actividad de lacasas,
por lo que es muy probable que los compuestos hayan sido
adsorbidos al micelio del hongo. La capacidad de adsorción
al micelio de iones, tintes, fenoles y otros compuestos ha sido
bien documentada, ya que en la pared celular están presentes
glucanos y quitina que contienen grupos químicos que actúan
como excelentes intercambiadores iónicos (Smith et al.,
2002). También se identificó una drástica reducción del
crecimiento del hongo en las tres concentraciones evaluadas,
sin embargo, el hongo fue capaz de remover fenoles.
Fig. 1. Remoción de fenoles durante el cultivo de T. hirsuta en medio
YMPG suplementado con efluente sintético a 35°C y 150 rpm
Figura 2. (A) Cinética de la producción de lacasas por T. hirsuta en un medio
con salvado de trigo. (B) consumo de fenoles durante cultivo a 35°C y 150
rpm
Se realizó una cinética para la producción de lacasas usando
un medio con salvado de trigo. Los resultados se muestran en
la Figura 2A donde se observa un incremento gradual de las
enzimas durante los primeros días de cultivo. La máxima
producción se alcanzó desde el día cuatro hasta el día siete
(7711.79, 8268.51, 8456, 7256.93 y 5349.53 U/ml
respectivamente). El nivel de actividad obtenido es alto
comparado con los reportados en literatura. La lignina
presente en el salvado de trigo contiene diversos monómeros
fenólicos que han sido descritos como inductores de la
síntesis de lacasas a nivel transcripcional. Asimismo, en este
cultivo se detectó la reducción del contenido de fenoles que
se liberan durante el crecimiento del hongo en el sustrato, lo
que confirma que el hongo también es capaz de utilizar los
fenoles como fuente de carbono.
Para llevar a cabo el tratamiento con enzimas lacasas se
usaron mezclas de fenoles a las concentraciones
mencionadas a las que se les adicionó 500L de extracto de
lacasas. Los resultados se muestran en la figura 3 donde se
observa la remoción completa de fenoles desde el inicio del
tratamiento. De esta manera se demostró la alta eficiencia de
112 REVISTA DEL CENTRO DE GRADUADOS E INVESTIGACIÓN. INSTITUTO TECNOLÓGICO MÉRIDA Vol. 31 NÚM. 63