RCGI V31 N63

MAY MENDOZA, A.P., AVILÉS BERZUNZA, E., PEÑA RODRÍGUEZ, L.M., GARCÍA SOSA, K. Y GODOY HERNÁNDEZ, G.
Figura 7. Regeneración de plantas de Pentalinon andrieuxii a partir de
cultivos de raíces transformadas. A: Raíces transformadas de la línea A1 del
explante de hoja con brotes espontáneos; B: Brotes transformados de la línea
de raíz A1 del explante de hoja en medio PC semisólido adicionado con
cefotaxima 50 µgmL -1 con cuatro meses de crecimiento.
Para comprobar la transformación de los brotes obtenidos a
partir del explante de hoja de Pentalinon andrieuxii, se utilizó
un estereoscopio modelo MZFL3 con filtros de fluorescencia
roja, con cámara FLUO III, y cámara del lente DFL320 al 1x.
Se utilizaron brotes con un mes de edad de 1.5 cm de altura,
con dos y cuatro hojas. Ver fig. 4.
Para confirmar la transformación de las líneas de raíces que
se obtuvieron en este trabajo, se amplificó el gen rolC (490
pb), uno de los genes rol que presenta el ADN-T en A.
rhizogenes. Para la extracción del ADN se utilizó el Kit Phire
Plant Direct PCR (Termo Scientific), utilizando los
oligonucleótidos específicos. En la figura 5 se puede
observar el gel de electroforesis con las muestras
amplificadas. En los carriles 1 y 2 no hay amplificación
porque son raíz y brote no transformado; tomados de plantas
germinadas in vitro, las raíces transformadas se encuentran
en los carriles 3, 4, 5 y el brote transformado en el carril 6 se
observa la amplificación esperada de 490 pb.
Figura 4. Brotes transformados con el gen de la proteína roja fluorescente
vía A. rhizogenes ATCC15834. RFP de la línea A1 de hoja de Pentalinon
andrieuxii, tomadas en estereoscopio modelo MZFL3 con cámara FLUO
III, cámara del lente DFL320 a 1x. Las letras muestran el testigo A: brote
testigo con luz normal, B: brote testigo con fluorescencia, C: brote testigo
con fluorescencia y luz normal. 1: brote transformado con luz normal, 2:
brote transformado con fluorescencia y 3: brote transformado iluminado
con fluorescencia y luz normal.
Figura 5. Detección de la integración del gen rolC en el genoma de brotes de
Pentalinon andreuxi. Los productos de PCR con cebadores específicos para
el gen rolC se fraccionaron por electroforesis en geles de agarosa. M:
escalera de ADN de 100 pb;(-): testigo negativo; carril 1: raíz testigo: carril
2: brote testigo; carril 3: raíz de hoja transformada; carril 4: raíz de hipocótilo
transformado; carril 5: raíz del explante de raíz transformado; carril 6: brote
del explante de hoja de la línea A1 transformados con A. rhizogenes
ATCC15834 RFP.
CONCLUSIONES
Se logró inducir la formación de raíces transformadas de los
explantes (hoja, raíz e hipocótilo) de Pentalinon andrieuxii
con A. rhizogenes ATCC15834 RFP que contiene el gen de
la proteína roja fluorescente. Así como la regeneración de
plantas a partir de raíces transformadas del explante de hoja
y de raíz. Se confirmó la transformación tanto de las líneas
de raíz obtenidas de los tres explantes (hoja, raíz e hipocótilo)
como de las plantas obtenidas a partir de la línea de raíz A1
de hoja, con dos métodos, el primero por medio de un
estereoscopio modelo MZFL3 con filtros de fluorescencia
roja, con cámara FLUO III, y cámara del lente DFL320 al 1x.
y el segundo por medio de la amplificación por PCR del gen
Rol C (490 pb) a partir del ADN genómico de las líneas de
raíces transformadas y los brotes transformados obtenidos
con el Kit Phire Plant Direct PCR de (Thermo Scientific).
AGRADECIMIENTOS
Proyecto CONACYT 223404.
REVISTA DEL CENTRO DE GRADUADOS E INVESTIGACIÓN. INSTITUTO TECNOLÓGICO MÉRIDA Vol. 31 NÚM. 63 67