RCGI V31 N63

ARTÍCULO DE INVESTIGACIÓN BIOTECNOLOGÍA VEGETAL
REVISTA DEL CENTRO DE GRADUADOS E INVESTIGACIÓN. INSTITUTO TECNOLÓGICO DE MÉRIDA. Vol. 31 NÚM. 63. PP. 65 – 68 OCT. 2016 ISSN 0185-6294
REGENERACIÓN DE PLANTAS A PARTIR DE RAÍCES TRANSFORMADAS DE Pentalinon andrieuxii
(Müll. Arg.) Hansen & Wunderlin CON EL GEN DE LA PROTEÍNA ROJA FLUORESCENTE
Ángela Patricia May Mendoza 1 , Elidé Avilés Berzunza 1 , Luis Manuel Peña Rodríguez 2 , Karlina García Sosa 2 y Gregorio
Godoy Hernández 1 .
Centro de Investigación Científica de Yucatán. 1 Unidad de Bioquímica y Biología Molecular de Plantas. 2 Unidad de Biotecnología. Calle 43 No. 130,
colonia Chuburná de Hidalgo. Mérida 97200, Yucatán, México. fax (52) 9999813900
Autor de contacto: ggodoy@cicy.mx
Recibido: 30/agosto/2016 Aceptado: 29/septiembre/2016 Publicado: 19/octubre/2016
RESUMEN
El cultivo de raíces transformadas es una de las técnicas más importantes del cultivo de tejidos vegetales, debido que presenta
ventajas experimentales como la conservación de la estabilidad genética, los altos rendimientos en la producción de
metabolitos secundarios, y la facilidad en su mantenimiento. Por ello, la aplicación de esta técnica a cultivos con importancia
agroindustrial constituye una poderosa herramienta biotecnológica. En este trabajo se establecieron diversas líneas de cultivo
de raíces transformadas de Pentalinon andrieuxii a partir de explantes de hojas, raíces e hipocótilos, mediante su cocultivo
con la cepa de Agrobacterium rhizogenes (ATCC15834) como testigo positivo y una cepa de A. rhizogenes (ATCC15834
RFP) que contiene a la proteína fluorescente roja como reportero. Se corroboró la transformación genética de las raíces
transformadas y de los brotes obtenidos, mediante dos métodos: i) la visualización de la fluorescencia roja por medio de
microscopía estereoscópica; ii) la determinación de la integración del transgen en el genoma, mediante análisis de PCR
amplificado del gen rolC (un amplicón de 490 pb). Con estas metodologías se demostró que todas las líneas a partir de las
raíces obtenidas y los brotes regenerados se transformaron exitosamente. Finalmente, se obtuvieron plantas regeneradas a
partir de la línea A1 de raíces transformadas a partir de explantes de hoja, así como de la línea A de explantes de raíz.
Palabras clave: Regeneración, raíces transformadas, proteína roja fluorescente, Pentalinon andrieuxii.
ABSTRACT
Culture of hairy roots is one of the most importante techniques of the plant tissue culture, because of its experimental
advantages, including conservation of the plant genetic stability, highler yields of secondary metabolites, and its ease of
managing. Thus, the aplication of this technique to crops with agroindustrial relevancy constitutes a powerful biotechnological
tool. In this work, different lines of transformed hairy root cultures were generated from explants derived from leaves, roots
and hypocotyles, by means of cocultivation with either a strain of Agrobacterium rhizogenes (ATCC15834) as positive
control, or with a strain of A. rhizogenes (ATCC15834-RFP) transformed with the red fluorescent protein as genetic reporter.
Corroboration of the genetic transformation of hairy roots and regenerated shoots was achieved by two methods: i) visual
detection of the red fluorescency by stereomicroscopy; ii) determination of the transgen integration in the genome by PCR
amplification of the rolC gen (a 490 bp amplicon). Usign this experimental approach demonstrated the sucesful transformation
of all lines generated from hairy roots and regenerated shoots. Finally, regenerated plants from leaf explants, as well as from
root explants were obtained.
Keywords: Regeneration, hairy roots, red fluorescent protein, Pentalinon andrieuxii
INTRODUCCIÓN
Pentalinon andrieuxii es una planta que pertenece a la familia
Apocynaceae, que se puede encontrar en la Península de
Yucatán. En la medicina tradicional se usan las hojas, raíces
y el látex, que producen actividades biológicas contra
diversas enfermedades tales como la causada por parásitos
protozoarios del género Leishmania (Leishmaniosis), en la
cual se utiliza una infusión de las raíces secas que se colocan
sobre las heridas para el tratamiento de erupciones cutáneas
derivadas de esta enfermedad; además de esto, masticar las
hojas y raíces frescas se utiliza para el tratamiento de las
mordeduras de serpientes, mientras que el látex se
recomienda para los dolores de cabeza y trastornos nerviosos
. Recientemente se ha reportado que tanto los extractos
acuosos y orgánicos de las raíces de Pentalinon andrieuxii
exhibieron actividad en las pruebas contra los parásitos de
Leishmania mexicana (Yam-Puc, et al., 2009).
Debido a las diversas propiedades que presenta Pentalinon
andrieuxii, surge el interés de estudiar más a detalle esta
especie, empleando la transformación genética de plantas,
que es una herramienta que tiene el objetivo de incorporar
ADN exógeno a una célula, y de esta manera conferirle
T E C N O L Ó G I C O N A C I O N A L D E M É X I C O . I. T. M É R I D A