Candida albicans-induzierte Genexpression in primären ... - OPUS

N-verknüpfte Mannosylreste an den Mannoserezeptor, während β-Glukan-
Komponenten aus der inneren Candida-Zellwand vom Dectin-1/TLR2-
Rezeptorkomplex erkannt werden.
Unter Berücksichtigung der in dieser Arbeit präsentierten Ergebnisse scheinen
jedoch in primären humanen Endothelzellen weder TLR2 noch TLR4 die NF-κBabhängige
Gentranskription nach einer C. albicans-Stimulation einzuleiten. Zum
einen konnte gezeigt werden, dass humane Endothelzellen unter den gewählten
Kulturbedingungen keine funktionellen TLR2 auf ihrer Oberfläche exprimieren, zum
anderen vermittelte transgen exprimierter TLR4 zwar Sensitivität gegenüber
Exposition mit dem etablierten TLR4-Agonisten LPS, nicht aber mit C. albicans.
Zudem konnte durch Knock-down von endogenen TLR4 durch siRNA in HUVEC die
C. albicans-induzierte CXCL8-Expression nicht gehemmt werden.
In zwei früheren Studien wurden gegensätzliche Aussagen über die basale
Expression von TLR2 auf Endothelzellen getroffen (Faure et al., 2000; Talreja et al.,
2004). Talreja et al. berichten von einer bestehenden Basalexpression, wohingegen
in der Studie von Faure et al. von einem kompletten Fehlen von TLR2 berichtet wird.
Durch Untersuchungen im Rahmen dieser Arbeit konnte eine basale TLR2-
Expression weder auf mRNA- und auf Proteinebene noch funktionell nachgewiesen
werden (Abbildungen 4.23, 4.24 und 4.25 (A)). Ein Vorkommen von TLR2 auf
HUVEC ist zumindest unter den hier vorliegenden Kulturbedingungen demnach sehr
unwahrscheinlich. In beiden oben zitierten Studien konnte mittels semiquantitativer
PCR und mittels Immunfluoreszenzfärbung auf mRNA- und Proteinebene belegt
werden, dass Endothelzellen basal TLR4 exprimieren. Im Rahmen der vorliegenden
Arbeit konnte dieses Ergebnis mit durchflusszytometrischen Färbungen nicht
bestätigt werden, was aber möglicherweise durch eine zu geringe Sensitivität der
Methode zu erklären ist (Daten nicht gezeigt). Dagegen bestätigten die Mikroarray-
Daten die Expression von TLR4 auf HUVEC (Abbildung 4.24). Dementsprechend
konnte bei einer funktionellen Testung von HUVEC durch Stimulation mit dem
synthetischen TLR1/2-Agonisten Pam3CSK4 weder eine NF-κB-Aktivierung noch
eine CXCL8-Expression festgestellt werden. Auch die TLR2/6-Agonisten MALP-2
und FSL-1 induzierten keine CXCL8-Expression in HUVEC. Der TLR4-Agonist LPS
stimulierte die Zellen hingegen stark (Abbildung 4.23). Die Effektivität der
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