Candida albicans-induzierte Genexpression in primären ... - OPUS

4 Ergebnisse
4.1 Etablierung eines in vitro-Modellsystems für Stimulationsstudien
Der Eintritt von Candida albicans in die Blutbahn kann zu einer schwerwiegenden
Sepsis und zur Invasion des Pilzes in tiefere Gewebe führen. Dabei stellen die
Endothelzellen der Blutgefäße die erste Kontaktstelle zwischen dem Pathogen und
dem Wirtsorganismus dar.
Die Abwehrmechanismen primärer humaner Endothelzellen gegen C. albicans und
ihre Rolle bei der lebensbedrohlichen Candida-Sepsis sollten im Rahmen dieser
Arbeit untersucht werden, daher galt es zunächst, ein geeignetes in vitro-System zur
experimentellen Infektion von HUVEC mit C. albicans zu etablieren. Eine besondere
Herausforderung bestand darin, in einem in vitro-Modell mit zwei unterschiedlichen
lebenden Organismen Versuchsparameter festzulegen und Bedingungen zu
schaffen, unter denen es zu einer reproduzierbaren Interaktion der beiden
Komponenten kam. Dies wurde gewährleistet, indem verschiedene Faktoren variiert
und das Maß der Aktivierung der HUVEC durch C. albicans bestimmt wurde. Da in
Endothelzellen und in anderen Zelltypen gezeigt wurde, dass Candida die
Expression des Chemokins CXCL8 (IL-8) induziert (Castro et al., 1996; Filler et al.,
1996; Schaller et al., 2002), wurde als Read-out in dieser Testphase die
Konzentration von CXCL8 im Überstand der Co-Kultur mittels ELISA gemessen. Als
weiterer messbarer Faktor wurde das Chemokin CCL20 untersucht, das ebenso wie
CXCL8 ein bekanntes Zielgen des NF-κB-Signalwegs ist. Die Konzentration von
CCL20 im Totalzelllysat der mit Candida stimulierten HUVEC wurde ebenfalls mittels
ELISA gemessen.
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