Candida albicans-induzierte Genexpression in primären ... - OPUS

3.11.4 Restriktionsverdau von Plasmid-DNA und Auftrennung von DNA-
Fragmenten durch horizontale Agarose-Gelelektrophorese.................44
3.11.5 DNA-Elution aus Agarosegelen............................................................44
3.11.6 Konzentrationsbestimmung von DNA-Lösungen..................................45
3.11.7 Klonierung von Doppelstrang-DNA-Oligos in pRetroSuper..................45
4 Ergebnisse........................................................................................................49
4.1 Etablierung eines in vitro-Modellsystems für Stimulationsstudien...............49
4.1.1 Co-Kultur von HUVEC und C. albicans................................................50
4.1.2 Die C. albicans-induzierte Expression von CXCL8 und CCL20 ist
dosisabhängig......................................................................................50
4.1.3 Einfluß des Serumgehalts auf die Stimulierbarkeit von HUVEC durch C.
albicans................................................................................................51
4.1.4 C. albicans induziert eine verzögerte Chemokinexpression in HUVEC52
4.1.5 Hitze-inaktivierte C. albicans induzieren keine CXCL8-Expression in
HUVEC ................................................................................................54
4.1.6 Die Aktivierung von HUVEC durch C. albicans ist nicht durch eine LPS-
Verunreinigung bedingt........................................................................55
4.2 Untersuchung des C. albicans-induzierten Transkriptoms von HUVEC......57
4.2.1 Das endotheliale Genexpressionsprofil nach Candida-Exposition .......57
4.2.2 Verifizierung der Mikroarray-Daten mittels quantitativer real time RT-
PCR .....................................................................................................59
4.3 Die Aktivierung der IKK/NF-κB Signalkaskade durch C. albicans...............60
4.3.1 C. albicans aktiviert IKK2 und führt zu Degradation von IκBα..............60
4.3.2 Stimulation mit C. albicans führt zu NF-κB-abhängiger Genexpression...
.............................................................................................................61
4.3.3 Die C. albicans-vermittelte Genexpression hängt von der Aktivierung
des NF-κB-Signalweges ab..................................................................62
4.3.4 Die C. albicans-induzierte Expression von CXCL8 und CCL20 ist von
der Aktivierung des IKK-Komplexes abhängig .....................................65
4.3.5 Die C. albicans-induzierte Expression von ICAM-1 ist IKK2-abhängig.67
III