Candida albicans-induzierte Genexpression in primären ... - OPUS

HEK293-Zelllinien jeweils mit spezifischen Antikörpern gegen TLR2 und TLR4
gefärbt. Bei HEK293 Wildtypzellen konnte keiner der beiden TLR-Rezeptoren
nachgewiesen werden. HEK293-hTLR1/2 hingegen exprimierten den stabil
transfizierten TLR2, und HEK293-hTLR4 waren stark positiv für TLR4 (Abbildung
4.25 (A) und (B)).
Abbildung 4.25 Durchflusszytometrische Untersuchung der TLR2- und TLR4-Expression auf
HEK293. HEK293, HEK293-hTLR1/2 und HEK293-hTLR4 wurden im Durchflußzytometer auf die
Expression der membranständigen Rezeptoren TLR2 und TLR4 untersucht. Dafür wurden die Zellen
mit einem entsprechenden Primärantikörper bzw. mit IgG als Isotypkontrolle markiert und mit einem
Cy5-gekoppelten Sekundärantikörper gefärbt. Die Fluoreszenz des Cy5-Farbstoffs wurde im vierten
Kanal (FL-4) gemessen. Dargestellt sind in (A) Overlay-Histogramme der Anti-TLR2-Färbungen bzw.
in (B) der Anti-TLR4-Färbungen (rot) jeweils mit der Isotypenkontrolle (schwarz).
Die getesteten HEK293-Zelllinien wurden dann für weiterführende
Stimulationsversuche verwendet. HEK293-Wildtypzellen sprachen dabei weder auf
eine Stimulation mit Pam3CSK4 noch mit LPS an (Abbildung 4.26 (A) und (B), links),
wohingegen HEK293-hTLR1/2 nach Stimulation mit Pam3CSK4, nicht aber mit LPS,
große Mengen an CXCL8 produzierten und eine starke κB-abhängige
Luciferaseaktivität entwickelten (Abbildung 4.26 (A) und (B), Mitte). HEK293-hTLR4
zeigten eine erhöhte CXCL8-Expression und eine κB-vermittelte Luciferaseaktivität
nach Exposition mit LPS, während Pam3CSK4 keinen Effekt hatte (Abbildung 4.26
(A) und (B), rechts).
Bei keiner der drei Zelllinien konnte eine Stimulation mit C. albicans die Expression
von CXCL8 oder eine gesteigerte κB-abhängige Luciferaseaktivität induzieren.
77