Candida albicans-induzierte Genexpression in primären ... - OPUS

Abbildung 4.33 Die Poly(I:C)-induzierte, TLR3-vermittelte Expression von CXCL8 ist teilweise
abhängig von MyD88. HUVEC wurden mittels Oligofectamine-Transfektionsreagenz mit einer siRNA
gegen MyD88 bzw. einer Kontroll-siRNA transfiziert. Nach 48 Stunden wurden die transfizierten Zellen
für acht Stunden mit C. albicans (MOI=1), Poly(I:C) (1 µg/ml) oder LPS (100 ng/ml) stimuliert. Die
Zellkulturüberstände wurden mittels CXCL8-ELISA untersucht (A). Der Gehalt an CXCL8 der
Totalzelllysate wurde im Western Blot überprüft, als Ladekontrolle diente eine ERK2-Färbung (B). Die
in (A) gezeigten Daten sind Mittelwerte und Standardfehler aus drei unabhängigen Versuchen, in (B)
ist ein repräsentativer Versuch von zwei unabhängigen Versuchen dargestellt.
Schließlich sollte untersucht werden, ob die Candida-induzierte proinflammatorische
Genexpression in HUVEC tatsächlich über TLR3 vermittelt wird. Während der
Knock-down von TLR3 durch Transfektion einer spezifischen siRNA keinen Effekt
auf die TNFα-induzierte CXCL8-Expression hatte (Negativkontrolle), konnte die
CXCL8-Expression nach Stimulation mit Poly(I:C) fast komplett gehemmt werden
(Positivkontrolle). Die Stimulation mit C. albicans führte in den TLR3-
herunterregulierten Zellen zu einer deutlich reduzierten CXCL8-Expression im
Vergleich zu den Kontrollzellen (Abbildung 4.34 (A) und (B)).
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