Candida albicans-induzierte Genexpression in primären ... - OPUS

Abbildung 4.32 HUVEC exprimieren funktionelle TLR3. HUVEC wurden für acht Stunden mit den
angegebenen Konzentrationen an Poly(I:C) bzw. mit IL-1β (100 U/ml) stimuliert. Die Totalzelllysate
wurden mittels Western Blot auf ihren Gehalt an CXCL8 untersucht. Eine Färbung von ERK2 diente
als Ladekontrolle. Gezeigt ist ein repräsentativer Versuch.
Zur Abhängigkeit der TLR3-Signaltransduktion von MyD88 gibt es in der Literatur
kontroverse Meinungen (reviewed in (Akira and Takeda, 2004)). Daher sollte für das
verwendete in vitro-System überprüft werden, ob die TLR3-vermittelte,
Poly(I:C)-induzierte CXCL8-Expression des Adaptermoleküls MyD88 bedarf. Durch
Transfektion der validierten siRNA gegen MyD88 wurde das MyD88-Protein
herunterreguliert und die Zellen anschließend mit C. albicans, Poly(I:C) oder LPS als
Positivkontrolle stimuliert. Die gleichen Stimulationen wurden bei Zellen durchgeführt,
die mit Kontroll-siRNA transfiziert worden waren. Alle Zellkulturüberstände und
Totalzelllysate wurden auf ihren Gehalt an CXCL8 untersucht (Abbildung 4.33 (A)
und (B)). Sowohl im ELISA als auch im Western Blot konnte eine deutlich niedrigere
CXCL8-Expression der siRNA MyD88-transfizierten Zellen nach Poly(I:C)-Stimulation
beobachtet werden. Wie erwartet resultierte in den MyD88-depletierten Zellen die
LPS-Stimulation in einer reduzierten CXCL8-Expression im Gegensatz zu den
Kontrollzellen. Auch die CXCL8-Expression nach Stimulation mit C. albicans war, wie
schon zuvor gezeigt (vgl. Abbildung 4.30), in diesen Zellen deutlich gehemmt.
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