Candida albicans-induzierte Genexpression in primären ... - OPUS

4.4 C. albicans aktiviert die p38 MAP Kinase
4.4.1 Stimulation mit C. albicans führt zur Aktivierung von p38
Es ist bekannt, dass die Induktion verschiedener Gene der Kooperation von
unterschiedlichen Signalkaskaden bedarf (Goebeler et al., 2001; Viemann et al.,
2004). Beispielsweise erfordert eine effiziente Induktion von CXCL8 neben der
Regulation durch NF-κB auch die Aktivierung der p38 MAP Kinase (Hippenstiel et al.,
2000; Hoffmann et al., 2002; Holtmann et al., 1999). Es sollte deshalb zunächst
untersucht werden, ob C. albicans in HUVEC nicht nur den NF-κB-Signalweg,
sondern auch p38 aktiviert. Dazu wurden Immunkomplex-Kinaseassays durchgeführt
unter Verwendung von 3pK und ATF-2 als Substrat für p38 (Abbildung 4.19).
Candida aktivierte endotheliales p38 innerhalb von 2-4 h nach dem Beginn der Co-
Kultur, während die maximale Aktivität von p38 durch TNFα innerhalb von 20 min
erreicht wurde.
Abbildung 4.19 C. albicans führt zu p38-Aktivierung in HUVEC. HUVEC wurden entweder mit
C. albicans (MOI=1, links) oder mit TNFα (2 ng/ml, rechts) über verschiedene Zeiten stimuliert. Zu den
angegebenen Zeitpunkten wurden Lysate der Endothelzellen hergestellt und diese im Immunkomplex-
Kinaseassay auf Phosphorylierung von 3pK bzw. ATF-2 (beides Substrate von p38) untersucht. Zur
Kontrolle der gleichmäßigen Beladung wurden die Lysate im Western Blot auf p38 gefärbt.
4.4.2 Die Candida-induzierte Expression ausgewählter Gene unterliegt der Co-
Regulation durch p38
Um die funktionelle Relevanz von p38 für die C. albicans-induzierte
Chemokinexpression zu untersuchen, wurden HUVEC mit dem pharmakologischen
p38-Inhibitor SB202190 in verschiedenen Konzentrationen präinkubiert. Dies führte
bei der anschließenden Stimulation zu einer dosisabhängigen Hemmung der C.
albicans-induzierten CXCL8-Expression. Die Auswertung mittels Western Blot und
ELISA ergab, dass die Konzentrationen an p38-Inhibitor, die für einen 50 %igen
Hemmeffekt (IC 50 ) nötig waren, für C. albicans wie auch für TNFα in einem Bereich
zwischen 1 und 0,1 µM lagen (Abbildung 4.20 (A) und (B)).
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