Candida albicans-induzierte Genexpression in primären ... - OPUS

6 x Probenpuffer für Agarose-Gelelektrophorese
0,25 % Bromphenolblau, 40 % Sucrose in dd H 2 O
1 x TAE-Puffer
40 mM Tris-Acetat und 1 mM Natrium-EDTA in dd H 2 O; mit Essigsäure auf pH 8,3
eingestellt
2.2.2 Puffer für Proteinbestimmungen und Protein-Aktivierungsassays
E1A Lysis Puffer (ELB)
150 mM Natriumchlorid, 50 mM HEPES (pH 7,5), 5 mM EDTA, 0,1 % NP-40 in
dd H 2 O; jeweils frisch mit 20 mM Natrium-β-Glycerophosphat, 0,5 mM
Natriumorthovanadat und 1 x Complete (Roche, Grenzach) supplementiert
Triton Lysis Puffer (TLB)
20 mM Tris-HCl (pH 7,4), 137 mM Natriumchlorid, 10 % Glycerol, 1 % Triton-X-
100, 2 mM EDTA, 50 mM Natrium-β-Glycerophosphat, 20 mM
Natriumpyrophosphat in dd H 2 O; jeweils frisch mit 1 mM Pefabloc ® , 5 µM/ml
Leupeptin, 5 µM/ml Aprotinin, 5 mM Benzamidin und 1 mM Natriumorthovanadat
supplementiert
Kinasepuffer
10 mM Magnesiumchlorid, 25 mM HEPES (pH 7,5), 25 mM Natrium-β-
Glycerophosphat in dd H 2 O; jeweils frisch mit 5 mM Benzamidin, 1 mM
Natriumorthovanadat und 0,5 mM Dithiothreithol (DTT) supplementiert
2.2.3 Puffer und Lösungen für Transfektionen
5 mg/ml Polybrene in dd H 2 O; sterilfiltriert
2 x HBS-Puffer
280 mM Natriumchlorid, 10 mM Kaliumchlorid, 1,5 mM Dinatriumhydrogenphosphat,
12 mM Glukose, 50 mM HEPES in dd H 2 O; mit Natronlauge
auf pH 7,05 eingestellt und sterilfiltriert
2,5 M Kalziumchlorid-Lösung; sterilfiltriert
1 mM HEPES in PBS; sterilfiltriert
10 mg/ml DEAE-Dextran in dd H 2 O; sterilfiltriert
100 mM Chloroquine in dd H 2 O; sterilfiltriert
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