Candida albicans-induzierte Genexpression in primären ... - OPUS

Hypothese eines indirekten Mechanismus der HUVEC-Stimulation durch C. albicans,
zumindest für die beiden wichtigsten Zytokine IL-1β und TNFα, widerlegt werden.
Abbildung 4.17 Die CXCL8-Expression in HUVEC nach C. albicans-Stimulation wird nicht
indirekt über IL-1β oder TNFα vermittelt. HUVEC wurden zunächst für 30 min in Medium mit Zusatz
eines IL-1-Rezeptor-Antagonisten (IL-1RA, 200 ng/ml), eines löslichen TNF-Rezeptor 2-Fc
(TNF-R2-Fc, 10 µg/ml) bzw. einer IgG-Kontrolle (von der Maus, 10 µg/ml) oder in zusatzfreiem
Medium präinkubiert. Anschließend wurden die Zellen für acht Stunden mit C. albicans (MOI=1),
TNFα (2 ng/ml) oder IL-1β (100 U/ml) stimuliert. Nach dieser Zeit wurden die Zellkulturüberstände
gesammelt und im ELISA auf CXCL8 untersucht. Der für jede Stimulation in Medium ohne Zusatz
erreichte CXCL8-Wert wurde als 100 % Induktion definiert und die anderen Werte entsprechend
darauf bezogen. Die gezeigten Daten sind Mittelwerte und Standardfehler aus drei unabhängigen
Versuchen.
Weiteren Aufschluss über die Fragestellung, ob die beobachtete κB-Aktivierung autooder
parakrin durch andere lösliche Faktoren ausgelöst wird oder über Faktoren, die
von C. albicans in das Zellkulturmedium abgegeben werden, ergaben Versuche mit
konditionierten Medien. Dafür wurden HUVEC für vier bzw. acht Stunden mit C.
albicans oder nur mit Medium kultiviert. Danach wurde der Zellkulturüberstand
sterilfiltriert und für weitere acht Stunden auf unabhängige HUVEC-Kulturen
gegeben. Als positive Kontrolle wurden parallel dazu HUVEC wiederum mit C.
albicans stimuliert (Abbildung 4.18). Zur Auswertung der Experimente wurde der
Gehalt an CXCL8 in den einzelnen Kulturüberständen bestimmt. Dabei wurden für
die konditionierten Medien die Differenzen der Werte vor und nach der achtstündigen
Stimulation gebildet. Das Ergebnis zeigte deutlich, dass die Überstände der
Candida-exponierten HUVEC im Gegensatz zu den lebenden C. albicans
Blastosporen keine CXCL8-Expression induzierten. Eine Beteiligung löslicher
Faktoren an der κB-Aktivierung konnte daher ausgeschlossen werden.
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