Candida albicans-induzierte Genexpression in primären ... - OPUS

Die Expression der Toll-like Rezeptoren TLR2 und TLR4 wurde nochmals überprüft,
indem die Rohwerte der Hybridisierungssignale der mit unstimulierten HUVEC
durchgeführten Oligonukleotid-Mikroarrays für diese Gene mittels MAS 5.0-Software
ausgewertet wurden. Ebenso wurde die Expression von TLR6, Dectin-1 und
Mannoserezeptor 1 überprüft. Als Positivkontrollen wurden die Signale von MyD88
und IRAK1 herangezogen. Die Auswertung zeigte deutlich, dass die untersuchten
HUVEC MyD88, IRAK1 und TLR4 exprimierten (Abbildung 4.24, graue Balken),
jedoch nicht TLR2, TLR6, Dectin-1 und Mannoserezeptor 1 (schwarze Balken). Die
gestrichelte Linie zeigt die durch MAS-Algorithmus berechnete Expressionsschwelle
an, die die Hintergrundbereinigung der Rohdaten und unspezifische Bindungen
berücksichtigt.
Abbildung 4.24 Relative Expression verschiedener PRRs in HUVEC untersucht im
Oligonukleotid-Mikroarray. Die Rohdaten der Hybridisierungsintensitäten für verschiedene Mustererkennende
Rezeptoren in unstimulierten HUVEC wurden mit Hilfe der MAS 5.0 Software ausgewertet
und als Mittelwerte mit Standardabweichung (± SD) aus vier unabhängigen Versuchen dargestellt. Die
Höhe der Hybridisierungssignale gibt Auskunft über die Expressionshöhe des jeweiligen Rezeptors im
Untersuchungsmaterial. Während TLR4 deutlich exprimiert ist, fehlen TLR2, TLR6, Dectin-1 und
Mannoserezeptor 1 (MRC1). IRAK1 und MyD88 dienen als positive Expressionskontrollen.
Die Rolle von TLR2 und TLR4 bei der Vermittlung des Candida-induzierten Signals
sollte anhand von etablierten Zelllinien weiter geklärt werden. Dazu wurden HEK293-
Wildtypzellen (HEK293 WT) untersucht, die weder endogene TLR2- noch
TLR4-Rezeptoren exprimierten, sowie transgene HEK293-Zelllinien, die entweder
humane TLR1- und TLR2-Rezeptoren (HEK293-hTLR1/2) oder humane TLR4
zusammen mit CD14 und MD-2 (HEK293-hTLR4) stabil exprimierten.
Die Expression der Rezeptoren auf der Oberfläche dieser kommerziell erworbenen
Zellen konnte mittels FACS-Analyse bestätigt werden. Dafür wurden die drei
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