Candida albicans-induzierte Genexpression in primären ... - OPUS

4.3.6 Der C. albicans-induzierten CXCL8-Expression liegt kein autokriner oder
parakriner Mechanismus zugrunde
Ein auffälliger Unterschied bei der Aktivierung der NF-κB-Signalkaskade durch die
beiden Stimuli Candida albicans und TNFα war der zeitliche Verlauf (vgl. Abbildung
4.11). Es lag daher die Vermutung nahe, dass ein auto- bzw. parakriner
Mechanismus, eventuell über IL-1β oder TNFα, für die verzögert auftretende
Aktivierung von NF-κB durch C. albicans verantwortlich sein könnte. Beide Zytokine
werden bekanntermaßen von HUVEC exprimiert und sind Auslöser einer
proinflammatorischen Immunantwort. Ein solcher autokriner Mechanismus über
TNFα wurde von der Arbeitsgruppe um S.G Filler unter anderem für die
Candida-induzierte CXCL8-Expression postuliert (Orozco et al., 2000).
Zur Untersuchung dieser Hypothese sollte daher im Folgenden geklärt werden,
inwieweit C. albicans die Expression von IL-1β oder TNFα induziert und ob diese
wiederum über membranständige Rezeptoren an der Oberfläche der HUVEC die
Expression von CXCL8 vermitteln. Dazu wurde der folgende Hemmversuch
konzipiert: HUVEC wurden mit IL-1β, TNFα oder C. albicans stimuliert, wobei dem
Medium 30 min vor Stimulationsbeginn verschiedene Zusätze beigefügt wurden. Die
biologische Aktivität von IL-1β und TNFα wurde durch den Zusatz von
Interleukin 1-Rezeptor-Antagonist (IL-1RA) bzw. Etanercept, einem löslichen
chimären Protein bestehend aus einem IgG-Fc-Anteil und der
Ligandenbindungsdomäne des menschlichen Tumornekrosefaktor-Rezeptors 2
(TNF-R2-Fc), neutralisiert. Als Kontrollen wurden dem Medium IgG beigemischt oder
die Zellen in zusatzfreiem Medium gehalten. Alle möglichen Kombinationen von
Inhibitor und Stimulus wurden für acht Stunden inkubiert und die anschließend
gewonnenen Zellkulturüberstände mittels ELISA auf CXCL8 untersucht.
Zur Auswertung dieses Versuchs wurde die für jeden Stimulus jeweils in
zusatzfreiem Medium erreichte CXCL8-Konzentration als 100 % Induktion definiert
und die anderen Werte entsprechend darauf bezogen. Es konnte beobachtet
werden, dass die IL-1β-induzierte CXCL8-Expression komplett durch IL-1RA, die
TNFα-vermittelte CXCL8-Expression vollständig durch TNF-R2-Fc gehemmt wurde.
Die durch C. albicans vermittelte CXCL8-Expression war in keinem Fall signifikant
verändert. In Anwesenheit von IgG-Isotypkontrolle wurden bei allen drei Stimuli die
CXCL8-Expressionen kaum beeinflusst (Abbildung 4.17). Somit konnte die
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