Candida albicans-induzierte Genexpression in primären ... - OPUS

weitere drei Stunden inkubiert und die Zellkulturüberstände nach insgesamt acht
Stunden Stimulation mittels CXCL8-ELISA ausgewertet.
Abbildung 4.5 C. albicans-induziertes CXCL8 wird innerhalb des achtstündigen
Versuchszeitraums nicht proteolytisch degradiert. HUVEC wurden mit C. albicans oder nur mit
Medium als Kontrolle stimuliert. Nach fünf Stunden Stimulationszeit wurden dem Medium die
Proteaseinhibitoren Aprotinin (1 µg/ml) und Pefabloc ® (0,25 mM) zugesetzt und die Ansätze für
weitere drei Stunden inkubiert. Zum Vergleich wurden parallele Stimulationen ohne Zusatz von
Proteaseinhibitoren kultiviert. Nach insgesamt acht Stunden Stimulationszeit wurden die
Zellkulturüberstände gesammelt und mittels ELISA auf CXCL8 untersucht. Gezeigt sind die
Ergebnisse eines Einzelversuches.
Unter Berücksichtigung der in den Abbildungen 4.4 und 4.5 dargestellten Ergebnisse
wurde für Nachweise von Proteinen, Phosphorylierungsreaktionen und
Transkriptionsaktivität eine Stimulationsdauer von acht Stunden festgelegt, für
DNA- und RNA-Untersuchungen wurde die Zeit auf fünf Stunden verkürzt.
4.1.5 Hitze-inaktivierte C. albicans induzieren keine CXCL8-Expression in
HUVEC
In der Literatur wurde beschrieben, dass zur Auslösung von Abwehrreaktionen in
Immunzellen schon der Kontakt mit abgetöteten C. albicans ausreicht (Arancia et al.,
1998). Andere Studien besagen, dass nur lebende C. albicans, nicht aber
Hitze-inaktivierte Candida die Zytokinexpression in Wirtszellen induzieren
(Mostefaoui et al., 2004; Schaller et al., 2002). Ob nun für die Stimulation von
HUVEC der Kontakt mit Oberflächenstrukturen von C. albicans genügt, um die
Expression von CXCL8 zu induzieren, sollte mit Hitze-inaktivierten C. albicans
untersucht werden. Dazu wurde die Übernachtkultur von C. albicans für 30 min auf
95°C erhitzt und ein Teil dieser Zellen zur Kontrolle der erfolgreichen
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