Candida albicans-induzierte Genexpression in primären ... - OPUS

CXCL8-Synthese und die κB-kontrollierte Transkriptionsaktivität in HUVEC induziert
werden, wohingegen der TLR2/TLR1-Agonist Pam3CSK4 weder die
CXCL8-Expression noch die κB-abhängige Luciferaseaktivität induzierte (Abbildung
4.23 (A), links und (B)). Ebensowenig konnten die TLR2/TLR6-Agonisten MALP-2
und FSL-1 die Expression von CXCL8 in HUVEC induzieren. Der Grund für die
ausbleibende Aktivierung der HUVEC durch Pam3CSK4, MALP-2 und FSL-1 waren
nicht die Präparationen der Agonisten selber, da diese bei Kontrollversuchen mit der
TLR2- und TLR4-positiven Monozyten-Zelllinie THP-1 in gleicher Konzentration zu
einer starken CXCL8-Expression führten (Abbildung 4.23 (A), rechts). Diese
Beobachtungen deuteten darauf hin, dass HUVEC zumindest unter den vorliegenden
Kulturbedingungen keine funktionellen TLR2 Rezeptoren an der Zelloberfläche
exprimieren, und dass folglich eine C. albicans-induzierte Stimulation nicht über
diesen Rezeptor vermittelt sein kann.
Abbildung 4.23 Funktionelle Untersuchung der TLR2- und TLR4-Expression in HUVEC. HUVEC
bzw. THP-1 wurden für acht Stunden mit dem TLR4-Agonisten LPS (100 ng/ml), dem
TLR2/TLR1-Agonisten Pam3CSK4 (200 ng/ml) oder den TLR2/TLR6-Agonisten MALP-2 (100 ng/ml)
und FSL-1 (100 ng/ml) stimuliert. Die Überstände der Zellkulturen wurden anschließend mittels ELISA
auf CXCL8 untersucht. Drei unabhängige Versuche wurden hier gemittelt und mit Standardfehlern
dargestellt (A). HUVEC wurden für einen Promoter-Reporter-Assay mit einem 6xκB-abhängigen
Luciferasekonstrukt transfiziert und wie unter (A) beschrieben mit LPS bzw. Pam3CSK4 stimuliert. Die
Auswertung erfolgte über die Messung der Luciferaseaktivität im Luminometer. Dargestellt ist ein
repräsentativer Versuch (B).
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