Candida albicans-induzierte Genexpression in primären ... - OPUS

HUVEC transfiziert. Infizierte HUVEC wurden vor der achtstündigen Stimulation mit
IL-1β oder C. albicans für drei Tage mit 250 µg/ml Zeozin selektioniert. Die
Zeozinresistenz der Zellen wurde über den transfizierten Vektor vermittelt.
Die durch die Stimuli in Leervektor-infizierten Zellen vermittelte Expression von
CXCL8 und CCL20 konnte durch die Überexpression der dominant-negativen
Mutanten annähernd komplett gehemmt werden (Abbildung 4.31 (A) und (B)).
Abbildung 4.31 Die retroviral vermittelte Expression von dominant-negativen Mutanten von
MyD88 bzw. IRAK1 hemmt die C. albicans-induzierte Expression von CXCL8 in HUVEC. HUVEC
wurden mit dem retroviralen Vektor pCFG5-IEGZ bzw. den durch diesen Vektor vermittelten Mutanten
von MyD88 (pCFG5-IEGZ MyD88dn-Myc) oder IRAK1 (pCFG5-IEGZ IRAK1-DD-HA) infiziert. Ein Teil
der über drei Tage mit Zeozin (250 µg/ml) selektionierten Zellen wurden zur Expressionskontrolle
lysiert und mittels Western Blot auf exprimiertes Myc-markiertes MyD88dn bzw. HA-markiertes
IRAK1-DD untersucht ((A) und (B), jeweils rechts oben). Die HUVEC wurden für acht Stunden mit
IL-1β (75 U/ml) oder C. albicans (MOI=1) stimuliert. Die Kulturüberstände wurden mittels
CXCL8-ELISA getestet (A), die Totalzelllysate wurden ebenfalls mittels ELISA auf CCL20
untersucht (B). Eine Basalaktivierung der Zellen, die vermutlich durch die retrovirale Infektion und die
lange Kultivierung hervorgerufen wurde, wurde zur besseren Vergleichbarkeit der Daten
herausgerechnet. Die dargestellten Werte sind Mittelwerte und Standardfehler aus drei unabhängigen
Versuchen.
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