Candida albicans-induzierte Genexpression in primären ... - OPUS

Selektion war die geforderte Mindestrate von 85 % GFP-Positivität erreicht, und die
Zellen wurden für verschiedene Untersuchungen weiterverwendet.
Abbildung 4.13 Quantifizierung der retroviralen Infektionsraten von HUVEC nach Selektion. Zur
Kontrolle der Infektionsrate mit dem GFP-codierenden Vektor pCFG5-IEGZ wurden die infizierten
HUVEC nach drei Tagen Zeozin-Selektion im FACS auf ihre GFP-Expression untersucht. Die
Einstellung der Parameter (GFP-Fluoreszenz im ersten Kanal (FL-1) und Größe der Zellen im
Forwardscatter (FSC)) wurde anhand von uninfizierten HUVEC vorgenommen (HUVEC Wildtyp).
Anschließend wurden die mit dem leeren pCFG5-IEGZ-Vektor infizierten HUVEC (HUVEC Leervektor)
und die IKK2-Mutante-exprimierenden HUVEC (HUVEC IKK2KD) gemessen. Mit Hilfe der
Quadrantenauswertung konnten so die lebenden, GFP-positiven Zellen quantifiziert werden (Q2,
jeweils rechts oben).
Für einen Vergleich der mRNA-Induktion in Leervektor- und IKK2KD-infizierten
HUVEC nach Candida-Exposition wurden RNA-Lysate der stimulierten HUVEC
mittels real time RT-PCR analysiert. Alle untersuchten Gene wurden, wie zuvor für
uninfizierte HUVEC gezeigt (Abschnitt 4.2.2), ebenfalls in Leervektor-infizierten
Zellen durch Stimulation mit C. albicans induziert (Abbildung 4.14, graue Balken). Die
gemessenen Werte lagen deutlich unter den Werten der Wildtyp-HUVEC. Diese
reduzierte Stimulierbarkeit ist ein häufig beobachtetes Phänomen von genetisch
manipulierten Zellen. Im Vergleich zu den Werten der Leervektor-infizierten HUVEC
waren alle gemessenen Werte der IKK2KD-infizierten HUVEC deutlich reduziert
(Abbildung 4.14, schwarze Balken). Wiederum zeigte das Gen CAR keine Regulation
nach C. albicans-Stimulation.
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