Candida albicans-induzierte Genexpression in primären ... - OPUS

Abbildung 4.26 C. albicans induziert keine CXCL8-Expression und keine κB-abhängige
Transkriptionsaktivität in TLR1/2- oder TLR4-positiven HEK293. HEK293 Zellen und deren stabile
Transfektanten mit TLR1 und TLR2 (HEK293-hTLR1/2) bzw. TLR4/CD14/MD-2 (HEK293-hTLR4)
wurden mit C. albicans (MOI=1), LPS (100 ng/ml) oder Pam3CSK4 (200 ng/ml) über acht Stunden
stimuliert. Die Überstände der Zellkulturen wurden im ELISA auf CXCL8 untersucht (A). Die gezeigten
Daten wurden aus 3 unabhängigen Versuchen gemittelt. Die gleichen Zellen wie unter (A)
beschrieben wurden für einen Promoter-Reporter-Assay mit einem κB-Promoter-abhängigen Firefly-
Luciferasekonstrukt und einem Ubiquitin-abhängigen Renilla-Luciferasekonstrukt transfiziert.
48 Stunden nach der Transfektion wurden die Zellen stimuliert und auf Luciferaseaktivität untersucht
(B). Die Daten sind auf Renilla-Luciferaseaktivitäten normierte Mittelwerte aus drei unabhängigen
Versuchen ± Standardfehler.
Die Beobachtung, dass TLR4 nicht an der Signalvermittlung von C. albicans beteiligt
ist, wurde zusätzlich durch die Ergebnisse von TLR4-Knock-down-Versuchen in
HUVEC gestützt. Hierfür wurde in HUVEC mittels Transfektion einer kommerziell
erworbenen siRNA unter Verwendung des Transfektionsreagenzes Oligofectamine
der endogene TLR4-Rezeptor herunterreguliert. Die CXCL8-Expression in diesen
Zellen war nach Stimulation mit C. albicans im Vergleich zu Kontroll-siRNA-
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