Candida albicans-induzierte Genexpression in primären ... - OPUS

4.3.5 Die C. albicans-induzierte Expression von ICAM-1 ist IKK2-abhängig
Neben den beiden Chemokinen CXCL8 und CCL20 sollte ebenfalls die Expression
eines Adhäsionsmoleküls auf der Oberfläche von HUVEC nach Aktivierung des
NF-κB-Signalweges untersucht werden. Eines der wichtigsten bekannten
NF-κB-regulierten Oberflächenmoleküle von HUVEC früherer Arbeiten ist ICAM-1
(intercellular adhesion molecule 1), das beispielsweise durch den
proinflammatorischen Stimulus TNFα stark hochreguliert wurde (Viemann et al.,
2004). Für dieses Adhäsionsmolekül konnte mittels real time RT-PCR bereits auf
mRNA-Ebene gezeigt werden, dass es nach C. albicans-Stimulation induziert wird
und dass IKK2KD diese Induktion zumindest teilweise hemmen kann (Abbildungen
4.10 und 4.14).
Trotz technischer Schwierigkeiten bei der durchflusszytometrischen Untersuchung
von Candida-stimulierten Zellen, die sich aus dem erheblichen Hyphenanteil
ergaben, konnte mittels Oberflächenfärbung gezeigt werden, dass in den mit
Leervektor infizierten HUVEC nach Stimulation mit C. albicans das membranständige
ICAM-1 hochreguliert wurde, und dass diese Proteinexpression nach Hemmung der
NF-κB-Signalkaskade durch IKK2KD unterbleibt. Zum Vergleich wurden die Zellen
auch in diesem Versuch parallel mit TNFα stimuliert (Abbildung 4.16).
Abbildung 4.16 IKK2KD hemmt die C. albicans-induzierte Expression von ICAM-1 auf HUVEC.
Die retroviral infizierten HUVEC wurden für acht Stunden mit C. albicans (MOI=1) oder TNFα (2 ng/ml)
stimuliert. Nach der anschließenden Oberflächenfärbung des Adhäsionsmoleküls ICAM-1 wurden die
Zellen im FACS untersucht. In den Leervektor-infizierten HUVEC wurde durch beide Stimuli die
Expression von ICAM-1 induziert (farbige Linien, oben), wohingegen in HUVEC, die die dominantnegative
Mutante von IKK2 exprimierten, die ICAM-1-Expression zum größten Teil bzw. komplett
gehemmt wurde (farbige Linien, unten). Zum Vergleich mit den IgG-Isotyp-Kontrollen (schwarze
Linien) wurden die Daten jeweils als Overlay-Histogramme dargestellt.
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