Candida albicans-induzierte Genexpression in primären ... - OPUS

2 Material
2.1 Chemikalien
Sofern nicht anders angegeben, wurden alle Chemikalien und Lösungsmittel in
p.a. Qualität von folgenden Firmen bezogen: AppliChem (Darmstadt), Fluka (Buchs,
Schweiz), Merck (Darmstadt), Roth (Karlsruhe) und Sigma (Taufkirchen)
2.2 Lösungen und Puffer
Gebräuchliche Lösungen und Puffer wurden nach Protokollen von Sambrook et al.
(Sambrook, 1989) hergestellt. Für die Durchführung der Experimente essentielle
Puffer und Lösungen sind nachfolgend aufgelistet:
2.2.1 Puffer für Western Blots und Gelelektrophoresen
4 x SDS-Probenpuffer
250 mM Tris-HCl (pH 6,8), 8 % Natriumdodecylsulfat, 40 % Glycerol, 10 %
β-Mercaptoethanol, 0,01 % Bromphenolblau in dd H 2 O
Trenngel-Vormix
0,75 M Tris-HCl (pH 8,8), 0,2 % SDS in dd H 2 O
Sammelgel-Vormix
0,25 M Tris-HCl (pH 6,8), 0,2 % SDS in dd H 2 O
1 x SDS-PAGE-Laufpuffer
25 mM Tris-HCl, 192 mM Glycin, 0,1 % SDS in dd H 2 O
1 x Blottingpuffer
25 mM Tris-HCl, 192 mM Glycin, 20 % Methanol in dd H 2 O
1 x TRIS-gepufferte Kochsalzlösung (TBS)
20 mM Tris-HCl, 137 mM Natriumchlorid in dd H 2 O, mit HCl auf pH 7,6 eingestellt
1 x TBS-Tween (TBST)
0,05 % Tween 20 in 1 x TBS
Milchpulver-Blockingpuffer
5 % Magermilchpulver in 1 x TBS
Strippingpuffer
100 mM β-Mercaptoethanol, 2 % SDS, 62,5 mM Tris-HCl (pH 6,7) in dd H 2 O
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