Candida albicans-induzierte Genexpression in primären ... - OPUS

LPS-induzierte Aktivierung von NF-κB vermittelten und dass dieser Rezeptor der
langgesuchte LPS Signalüberträger sei (Kirschning et al., 1998; Yang et al., 1998).
Es konnte jedoch später gezeigt werden, dass die verwendeten kommerziell
erworbenen LPS-Präparation mit bakteriellem Lipoprotein, einem TLR2-Liganden,
verunreinigt waren (Lee et al., 2002) und dass TLR4 statt TLR2 der Signalüberträger
für LPS ist (Poltorak et al., 1998; Qureshi et al., 1999).
Um Artefakte dieser Art auszuschließen wurden Stimulationsversuche in An- und
Abwesenheit von Polymyxin B Sulfat (PMB) durchgeführt. PMB kann an den
Lipid A-Anteil von LPS binden und so dessen biologische Aktivität neutralisieren. Die
durch LPS in HUVEC induzierte Expression von CXCL8 wurde durch Zugabe von
PMB auf Kontrollniveau gehemmt (Abbildung 4.7, links), wohingegen die
Candida-induzierte CXCL8-Expression durch PMB kaum beeinflusst wurde
(Abbildung 4.7, rechts). Es konnte daher geschlossen werden, dass die Stimulation
der HUVEC Candida-spezifisch war und nicht durch LPS-Verunreinigungen
verursacht wurde.
Darüber hinaus wurden Limulus Amoebozytenlysat (LAL)-Assays durchgeführt (in
Kooperation mit Dr. T. Vogl vom Institut für Experimentelle Dermatologie der
Universität Münster), die die Abwesenheit von LPS-Verunreinigungen in der
verwendeten Candida-Präparation bestätigten (Daten nicht gezeigt).
Abbildung 4.7 Die C. albicans-induzierte CXCL8-Expression in HUVEC wird nicht durch eine
LPS-Verunreinigung verursacht. Polymyxin B Sulfat (PMB)-präinkubierte bzw. unbehandelte
HUVEC wurden für acht Stunden in An- bzw. Abwesenheit von PMB (50 µg/ml) mit LPS (10 ng/ml)
oder C. albicans (MOI=1) stimuliert. Die Kulturüberstände wurden mittels CXCL8-ELISA untersucht.
Die Daten wurden aus drei unabhängigen Versuchen gemittelt, die Fehlerbalken zeigen die
Standardfehler (± SEM).
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