Candida albicans-induzierte Genexpression in primären ... - OPUS

Abbildung 4.21 Die C. albicans-induzierte Expression von CCL20 kann nicht durch einen
p38-Inhibitor gehemmt werden. HUVEC wurden wie in Abbildung 4.20 beschrieben mit SB202190
behandelt und stimuliert. Die Totalzelllysate wurden mittels ELISA auf ihren Gehalt an CCL20
untersucht und die erhaltenen Werte auf den Proteingehalt der Proben normiert. Die gezeigten Daten
stellen Mittelwerte und Standardfehler aus drei (C. albicans) bzw. zwei (TNFα) unabhängigen
Versuchen dar.
4.4.3 Der p38-Inhibitor hat keinen direkten Einfluss auf C. albicans
Anschließend wurden parallele Stimulationsversuche mit drei verschiedenen
Candida-Präparationen durchgeführt um auszuschließen, dass der verwendete
p38-Inhibitor SB202190 einen direkten Effekt auf C. albicans hat, der die Virulenz
des Pilzes verändern und somit die gehemmte CXCL8-Expression in HUVEC
erklären könnte. Neben den in zusatzfreiem M199 gewachsenen Candida-Hefen
wurden Hefen verwendet, die in Anwesenheit von 1 µM SB202190 oder in
Anwesenheit von DMSO in der gleichen Konzentration, wie sie zum Herstellen der
SB202190-Lösung im Medium nötig war, angezüchtet worden waren. Alle drei
Übernachtkulturen wurden wie in Kapitel 3.1.3.1 beschrieben zentrifugiert, das
Candida-Pellet mit PBS einmal gewaschen und wieder in PBS resuspendiert.
Lösungsmittelreste oder Rückstände des Inhibitors in den Candida-Suspensionen
konnten somit ausgeschlossen werden. Nach einer achtstündigen Co-Kultur von
HUVEC mit den unterschiedlichen C. albicans-Präparationen wurden die
Zellkulturüberstände und die Totalzelllysate gewonnen und mittels ELISA auf CXCL8
bzw. CCL20 untersucht. Für beide Chemokine konnten keine Unterschiede bezüglich
ihrer Expression unter den unterschiedlichen Stimulationsbedingungen gefunden
werden (Abbildung 4.22).
Der beobachtete Hemmeffekt von SB202190 auf die Candida-vermittelte
CXCL8-Expression (Abbildung 4.20) ist also keine direkte Wirkung des Inhibitors auf
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