Candida albicans-induzierte Genexpression in primären ... - OPUS

4.3.4 Die C. albicans-induzierte Expression von CXCL8 und CCL20 ist von der
Aktivierung des IKK-Komplexes abhängig
In früheren Arbeiten wurde gezeigt, dass die Kinase-inaktivierte Mutante von IKK2
(IKK2KD) die TNFα-vermittelte Induktion bekannter NF-κB-Targetgene nicht nur auf
mRNA-, sondern auch auf Proteinebene hemmt (Viemann et al., 2004). Daher sollte
auch in der vorliegenden Arbeit untersucht werden, inwieweit NF-κB an der
Candida-induzierten Expression von CXCL8 und CCL20 beteiligt ist und ob sich
deren Expression durch IKK2KD hemmen lässt. Zum Vergleich mit der bekannten
Datenlage wurden die Versuche parallel auch mit dem Stimulus TNFα durchgeführt.
Die verwendeten infizierten Zellen wurden zur Kontrolle der Überexpression von
IKK2KD im Western Blot mit einem Antiserum gegen IKK2 gefärbt, wobei der
verwendete Antikörper die Mutante von IKK2 ebenso binden konnte wie endogene
IKK2. Der Gehalt an endogener IKK2 war in HUVEC jedoch so gering, dass auf den
Western Blots keine Banden für die Leervektor-infizierten Zellen zu erkennen waren.
Die Banden der überexprimierten mutierten IKK2 waren dagegen deutlich zu sehen
(Abbildung 4.15 (A)). Somit wurde eine ausreichend hohe Expression der mutierten
IKK2 belegt, um die nachfolgend erhaltenen Daten als Effekt von IKK2KD zu
interpretieren. Die infizierten HUVEC wurden für acht Stunden mit C. albicans oder
TNFα stimuliert, danach wurden die Zellkulturüberstände und Zelllysate mittels
ELISA auf CXCL8 bzw. CCL20 untersucht. Entsprechend der gehemmten
mRNA-Induktion von CXCL8 und CCL20 wurde auch hier eine Hemmung der
Proteinexpression beider Chemokine durch IKK2KD beobachtet (Abbildung 4.15 (B)).
Sowohl die Candida-induzierte als auch die TNFα-vermittelte Expression von CXCL8
und CCL20 bedarf also einer Aktivierung des NF-κB-Signalweges, was die durch die
real time RT-PCR erhaltenen Ergebnisse bestätigt.
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