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contaminación por helmintos en productos de origen animal (leche, carne), y
finalmente el diagnóstico podría ser incluido en la vigilancia de importación y
exportación de animales, esto último para prevenir la entrada de nuevos
géneros de helmintos resistentes a los antihelmínticos (Shallig et al., 1994,
Dalton et al., 2003, Montalvo et al., 2006). Por otro lado, la información
generada en el diagnóstico parasitológico, inmunológico y molecular son
fuente de apoyo en las diferentes áreas de estudio dirigidos hacia la
prevención y control de helmintos. Sin embargo, es necesario identificar
previamente el problema a resolver y establecer estrategias de trabajo que se
adapten a las condiciones de laboratorio, estudio e incluso a la aplicación de
control en campo.
Lo más importante del diagnóstico en área de helmintología es el material
biológico, la forma de obtención, conservación y procesamiento del mismo, lo
cual asegura calidad y durabilidad. Se sugiere realizar el diagnóstico con base
al previo conocimiento de patógenos con objeto de optimizar tiempo y equipo
de laboratorio, así como disminuir el manejo del germoplasma.
A continuación se describen las principales tecnologías empleadas en el
diagnóstico inmunológico y de biología molecular relacionado a las
helmintiasis en rumiantes domésticos.
9.2. TÉCNICAS EN INMUNOLOGÍA
9.2.1. OBTENCIÓN DE ANTÍGENOS
Los estadios infectantes y adultos son usados comúnmente en el diagnóstico
de helmintos. El primer paso para la preparación de antígenos es la colecta del
mismo. Las soluciones amortiguadores de fosfatos con pH neutro y (SSAF,
Anexo 1) soluciones bacteriostáticas como 0.1% de azida de sodio son
recomendadas. La conservación de muestras a 4C, se usa con objeto de
evitar la desnaturalización del material. Asimismo, el uso de material estéril,
refrigeradores y congeladores y espectrofotómetro se emplean para la
preparación y determinación del mismo. A continuación se ejemplifica la
obtención de tres diferentes tipos de productos metabólicos,
excreción/secreción, superficie y de membrana aplicados a Haemonchus spp
(nematodo), Fasciola hepatica (trematodo) y Moniezia (cestodo).
EXTRACTO CRUDO Ó SOMÁTICO: El extracto crudo (EC) de los helmintos
esta conformado por moléculas de queratina, lípidos, carbohidratos y
proteínas, que los protegen y les aportan energía. Previo a su uso, se debe
lavar el germoplasma en SSAF, pH 7.2 y antibiótico (Anexo 1). Los parásitos
serán macerados en mortero a4C,sonicador, estallamiento osmótico, etc.,
conteniendo SSAF y detergentes que ayuden a solubilizar proteínas de
membrana como son: 0.1 a 1% de Triton X-100 y 0.1%-2% de 3-[(3-
Cholamidopropyl) dimethylamino]-1-propanesulphonate (CHAPS). Se
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