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Figura 14.3.1.Ciclo biológico de Oestrus ovis (Bautista 2006).
14.2. Preparación de antígeno de larvas de Oestrus ovis
De acuerdo con estudios previos, se recomienda colectar larvas del segundo
estadio (L2) de O. ovis a partir de ovejas o cabras sacrificadas en el rastro.
Luego, las larvas se lavan minuciosamente con solución salina amortiguadora
de fosfatos (pH 7.2) estéril, conteniendo inhibidores de proteasas y se
maceran con un homogeinizador de cristal en baño de hielo. A continuación, el
macerado se deja en agitación lenta utilizando un rotor magnético durante 18
horas a 4 °C. Transcurrido ese tiempo, la suspensión se centrifuga a 5000 x g
durante 30 minutos (4°C) en una centrífuga refrigerada. Posteriormente, se
colecta el sobrenadante que constituye “el antígeno” y se descarta el
sedimento. Finalmente, se determina la cantidad de proteína por medio del
método de Lowry et al.
(1951) o de Bradford, y se envasa el antígeno en
alícuotas que se congelan a -70 °C hasta su uso.
14.3. Prueba de Inmunoensayo en Capa Delgada (ICD)
Esta prueba, relativamente fácil de hacer y de bajo costo, es ideal para
llevarse a cabo en el campo ya que no requiere de condiciones complicadas
para llevarse a cabo. La técnica se basa en la capacidad de muchas
preparaciones antigénicas de adsorberse con firmeza a superficies de plástico
(poliestireno) y de formar una capa homogénea que mantiene su actividad
serológica, sobre la que se colocan diluciones de los sueros a analizar.
Después de un periodo de incubación, lavado y secado, la interacción
antígeno-anticuerpo es visible cuando la superficie se expone al vapor de agua
o al vaho de la boca. En el sitio en el que ocurrió una respuesta específica
antígeno-anticuerpo se observa la formación de gotas de agua de mayor
tamaño en comparación con las que se forman en el lugar donde no se
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