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loqueador y se incuba durante 30 min a 37°C en la cámara húmeda.
Posteriormente se realizan dos lavados con PBS1x/Tween 20 al 0.01% y uno
con agua bi-destilada, durante 5min en agitación suave. En cada uno de los
círculos se coloca una gota de glicerina bufferada, adicionada con azul de
Evans (ver soluciones al final del capitulo), para evitar la fluorescencia
inespecífica, para ser observadas en un en un microscopio de fluorescencia
con filtros específicos para FITC, utilizando el objetivo de inmersión 100X.
10.5. Interpretación de la prueba:
Para interpretar la prueba hay que observar cuidadosamente los dos controles
(-y +) y comparar con los sueros problema, si en el campo visual no vemos
absolutamente nada el resultado es negativo, si observamos los parásitos
fluoresciendo (Figura 10.4), el resultado es positivo, si vemos fluorescencia
inespecífica es decir si no vemos la forma de los parásitos o solo vemos el
contorno de los eritrocitos, se puede considerar como sospechoso, lo cual se
confirma repitiendo la prueba.
Figura 10. 4. Reacción positiva a la prueba de IFI
Microfotografía de Babesia bigemina marcada con un antisuero
específico revelada con un antisuero de conejo anti IgG bovina
conjugado con FITC, en un microscopio de Epifluorescencia con
filtro de excitación de 999 nm.
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