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10. Diagnóstico de la infección por Babesia bovis y Babesia bigemina por
medio de la prueba de inmunofluorescencia indirecta (IFI)
Alfonso Falcón Neri
JuanAlberto RamosAragón
10.1. Introducción
El método tradicional de diagnostico de la babesiosis, es mediante la
identificación del agente causal, por medio del examen microscópico de frotis
finos y gruesos de sangre teñidos. Por ejemplo, con colorante Giemsa. La
sensibilidad de esta técnica es tal que puede detectar parasitemias como un
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parásito por 10 glóbulos rojos (Bose et al, 1995). La diferenciación de especies
se puede realizar en frotis finos pero se dificulta en gruesos los cuales tienen
mayor sensibilidad. Esta técnica es útil para detectar infecciones agudas, pero
no para la detección de infecciones crónicas, subclínicas y/o detección de
portadores asintomáticos, en los cuales, las parasitemias son muy bajas (OIE).
Por esta razón, se han implementado diversas técnicas serológicas entre las
cuales se incluye, Fijación del complemento (Mahoney 1962),
hemoaglutinación indirecta (Goodger 1971), aglutinación rápida en tarjeta
(Todorovic y Kuttler 1974), aglutinación con partículas de latex (López et al.
1978), e inmunofluorescencia indirecta, (Goff et al. 1982).
La prueba de inmunofluorescencia fue descrita por primera vez a principios de
1940. Para 1954 se describió la técnica de Inmunofluorescencia indirecta. Esta
método consiste en conjugar ciertos colorantes fluorescentes con el
anticuerpo, resultando un conjugado sensible con reactividad inmunológica
inalterada (Sikora y Smedley 1986), en la cual tenemos un antígeno fijado a
una superficie, en este caso un porta objetos de vidrio, si hay anticuerpos
específicos para el antígeno en el suero proveniente de los animales a probar
se forma un complejo antígeno-anticuerpo; luego se adiciona un segundo
anticuerpo conjugado a un colorante fluorescente y se expone a luz ultra
violeta (UV); entonces, el complejo emite una luz fluorescente cuyo color
dependerá del fluorocromo empleado.
Las partículas que se hacen luminiscentes al ser expuestos a rayos
ultravioleta, X y/o catódicos, se dice que son fluorescentes. Si la luminiscencia
continúa después de haber sido cortada la excitación se dice que es
fosforescente (Klein y Hurlbut 1970).
Los fluorocromos son moléculas químicas que absorben luz a una
determinada longitud de onda y emiten a otra diferente. Se caracterizan por
sus espectros de excitación y de emisión, por lo que su utilización está
condicionada por el tipo de láser del que disponga el citómetro y de la longitud
de onda a la que se exciten ellos mismos. El espectro de excitación y emisión
varía con los diferentes fluorocromos. Si disponemos de una láser con una
longitud de onda de 488 nm los fluorocromos que utilicemos deberán ser
capaces de ser excitados a esta longitud de onda y además emitir en
longitudes lo mas lejanas posibles entre ellas. En las pruebas de
inmunofluorescencia los anticuerpos conjugados con fluorocromos la
intensidad de fluorescencia detectada por el citómetro es directamente
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