Abrir - Bienvenidos a la Biblioteca del INIFAP - Instituto ...

9.3. TÉCNICAS MOLECULARES
La tecnología para el estudio y detección de ácidos nucleicos ha tenido gran
impacto en muchas áreas de parasitología, incluyendo la identificación de
modelos, como es el nematodo de vida libre Caenorhabditis elegans (9.9 Mb) y el
nematodo hematófago, Haemonchus spp (60 Mb), así como parásitos que
afectan animales y humanos como los trematodos Schistosoma spp y F. hepatica
(270 Mb) (Sanger Institute, www.sanger.ac.uk; TIGR database, www.tigr.org;
Genome Biology, genomebiology.com). La secuenciación total de éstos
patógenos han apoyado el estudios filogenéticos, ejemplo C. elegans,
con el
cual se ha permitido determinar importantes mecanismos de virulencia en
nematodos similares a los que se observan en géneros de la familia
Trichostrongylidae (Dressen et al ., 2004 ).
Diversas técnicas han sido aplicadas a helmintos, entre las principales están:
hibridación de ácidos nucleicos, clonación, secuenciación de DNA, reacción
en cadena de la polimeraza (PCR). En particular, la aplicación de la técnica de
PCR (Saiki et al., 1985; Mullis et al.,
1986) ha revolucionado la investigación y
se ha encontrado que el PCR tiene amplia aplicabilidad, debido principalmente
a la sensibilidad, la cual permite la implicación de genes o fragmentos de los
mismos a partir de una mínima cantidad de material biológico. El método de
extracción de los ácidos nucleicos (DNA/RNA) es muy importante porque nos
garantiza la pureza, confiabilidad de resultados y conservación de mismos
(Peña et al., 1994, Gómez et al.,
1997).
Por otro lado, podría ser difícil obtener ADN/RNA en cantidades suficientes y
puros, provenientes de algunos estadios de helmintos, debido a la cutícula de
queratina que los conforman (Dawkins & Spencer, 1989) y a múltiples
substancias que precipitan los ácidos nucleicos durante el proceso de
aislamiento (Simposon et al., 1982; McManus et al.,
1985), lo cual inhibe la
subsecuente amplificación enzimática. Por ello, el uso de tratamientos con
SDS y proteinasa K, seguido por la extracción de fenol/cloroformo y
precipitación con etanol son reactivos usados para solventar dicho problema
(Passer et al.,
1993). Asimismo, un amplio rango de mini-columnas para la
purificación de ácidos nucleicos está actualmente disponible en el mercado,
por lo que ahora es posible obtener diferentes tipos de DNA/RNA provenientes
de helmintos con mayor confiabilidad de resultados.
A continuación se describen algunos ejemplos de los métodos moleculares
para el diagnóstico en helmintos, iniciando con la obtención de DNA
genómico de H. contortus,
la cual podría ser aplicad a otros helmintos. La
preparación de soluciones se podrá observar en el Anexo 2
160