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proporcional al número de moléculas unidas al antígeno. La intensidad de
fluorescencia también depende del fluorocromo utilizado, ya que hay
fluorocromos que emiten con mayor intensidad que otros. En algunas
ocasiones ciertos fluorocromos producen el llamado fenómeno “Quenching”
referido como la transferencia de energía entre dos moléculas marcadas con el
mismo fluorocromo, y que están suficientemente cercanas. Debido a ello una
molécula puede ser excitada por la luz del láser y por la luz que emite la otra
molécula. Los fluorocromos mas utilizados son:
FITC: Isocianato de fluoresceina. Se excita con luz azul a 490nm y emite a
514nm. Produce Quenching.
-La familia Alexa Fluor. Que se puede excitar desde los 346 nm. y emite hasta
los 775 nm dependiendo de el cromóforo usado
- PE: Ficoeritrina. Se excita a 480 nm pero no es su máximo (565 nm) y emite a
578 nm. No produce Quenching.
- PerCP: Proteína Clorofila Peridinina. Se excita a 488 nm y emite a 520 nm
- TRITC: Isocianato de Tetrametil Rodamina se excita a 540 nm y emite a 570
nm.
- Rojo Texas: Se excita a 596 nm y emite a 615 nm
- Ficocianina: Se excita a 620 nm y emite a 650 nm.
-Aloficocianina: Se excita a 650 nm y emite a 660 nm.
- Tricolor: Se excita a 540nm y emite a 570nm.
- APC: Utilizado como cuarto color en citometros de BD. Se excita a 635 nm y
emite a 670 nm.
- Los fluorocromos empleados para marcar ácidos nucleicos son:
- Yoduro de Propidio que se excita a 493 nm y emite a 630 nm,
- Bromuro de Etidio
- Naranja de Acridina que para marcar ADN se excita a 480 nm y emite a 510
nm y paraARN se excita a 440/470 nm y emite a 650 nm,
- Hoescht 33342 que se excita a 343 nm y emite a 482 nm, Naranja de Triazol
que se excita a 509 nm y emite a 533 nm, Mitramicina, - - Cromomicina A3, y el
DAPI que se excita a 345 nm y emite a 455 nm. (www.citometriadeflujo.com)
Esta prueba nos permite identificar animales que alguna vez estuvieron
expuestos a un patógeno y que fueron capaces de montar una respuesta
inmune en contra del mismo, es de suma utilidad para realizar estudios
epidemiológicos, además de poder discriminar animales negativos de los
positivos en la selección de individuos para ser utilizados en investigaciones.
10.2. Preparación de antígeno:
Para la preparación del antígeno que va a ser utilizado en la prueba de IFI para
el diagnóstico de la babesiosis, primeramente se tendrá que contar con sangre
que contenga una buena cantidad de glóbulos rojos infectados con el parásito,
por lo menos 3% de parasitemia, esto se puede lograr de dos maneras: La
primera, por medio del cultivo del parásito in vitro (Palmer et al. 1982, Figueroa
et al. 1984) y la segunda por medio de inoculación múltiple en becerros
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