Modèles transgéniques pour l'étude de la fonction ... - Epublications

3) Détection du locus IgH recombiné portant le gène Cγ1 humain (allèle gamma 1
knock-in ou γ1KI) et du locus IgH sauvage (allèle µ sauvage) par PCR
L’ADN génomique d’un échantillon de queue d’animaux homozygotes obtenus comme
précisé ci-dessus, a été analysé par PCR à l’aide des deux couples d’amorces suivants :
- couple spécifique du locus IgH murin non muté (allèle µ sauvage) :
- amorce UpstreamSpe I Smu : 5’ GAG TAC CGT TGT CTG GGT CAC 3’
- amorce SacI-3’Imu : 5’ GAG CTC TAT GAT TAT TGG TTA AC 3’
La réaction d’amplification a été réalisée avec une température d’hybridation de 61°C. Cette PCR
amplifie en 30 cycles un fragment de 91 paires de bases-encadrant le site Spe I-spécifique du
locus IgH murin non muté.
gamma1 knock-in ou γ1KI ) :
- couple spécifique du locus IgH recombiné portant le gène Cγ1 humain (allèle
- amorce NeoI : 5’ GCA TGA TCT GGA CGA AGA GCA T 3’
- amorce Neo2 : 5’ TCC CCT CAG AAG AAC TCG TCA A 3’
La réaction d’amplification a été réalisée avec une température d’hybridation de 55°C. Cette PCR
amplifie en 30 cycles un fragment de 120 paires de bases spécifique du locus IgH recombiné
portant le gène Cγ1 humain.
Une lignée de souris homozygotes pour la mutation γ1KI, dénommée ci-après lignée gamma
1 knock-in ou gammaprim a été établie ; les animaux de cette lignée sont systématiquement et
simultanément négatifs en PCR avec les amorces spécifiques de l’allèle µ sauvage et positifs en
PCR avec les amorce spécifiques de l’allèle gamma 1 knock-in.
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Figure 3: Southern Blot sur ADN
génomique de queue de souris
WT (piste A)
hétérozygote γ1-KI (piste B)
homozygote γ1-KI (piste C)
homozygote γ1-KI floxé (piste D)