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2 Istruzioni di carattere generale
2.2 Istruzioni generali sul prelievo e conservazione dei campioni
Plasma
Per plasma si intende la parte liquida del sangue resa incoagulabile con l'aggiunta di anticoagulanti.
Il plasma è più semplice da ottenere rispetto al siero. La quantità ottenuta è maggiore ed il
pericolo di emolisi minore. Nel ricavare il plasma si presti attenzione al corretto rapporto con
l'anticoagulante; in caso contrario sussiste il pericolo di emolisi. Evitare di discostarsi considerevolmente
dalla quantità di sangue indicata sulla provetta, sia per eccesso che per difetto. Appena
terminato il prelievo, la provetta deve venire capovolta più volte delicatamente per miscelare
l'anticoagulante con il sangue. Subito dopo centrifugare il sangue per 5 - 10 minuti ad un basso
numero di giri (3500 giri/min.).
Gli anticoagulanti più usati sono EDTA (acido etilendiamminotetracetico), eparina e citrato di
sodio.
I seguenti parametri non possono tuttavia venire determinati su plasma EDTA:
- K, Ca, Mg, ferro, ALP, glucosio, acido lattico.
Per alcuni parametri è necessario l'uso di un inibitore particolare della coagulazione:
- Per i parametri della coagulazione: plasma citrato (congelato)
o di uno stabilizzante specifico:
- Per il Cardiopet TM proBNP: provette specifiche in cui immettere plasma con EDTA.
Siero
Per siero si intende la parte liquida del sangue ottenuta dalla coagulazione della fibrina e
dei globuli (plasma senza fibrina).
Il processo per ricavare il siero è più complesso rispetto a quello per ottenere il plasma.
L'intervallo di tempo prima che inizi la coagulazione varia a seconda dell'individuo e della
specie animale.
Per ottenere il siero occorre lasciare il sangue fino a coagulazione completa in un contenitore
privo di anticoagulanti. Per velocizzare il processo può venire utilizzato un attivatore
della coagulazione (p.es. provetta per sierare con microsfere; le provette per sierare con
gel separatore non possono essere utilizzate per alcuni particolari parametri, p.es.
digossina, fenobarbitale, insulina).
Dopodiché staccare delicatamente con una spatolina pulita i coaguli aderenti al bordo
della provetta e centrifugare la provetta per 5 - 10 minuti ad un basso numero di giri
(3500 giri/min). Immediatamente dopo asportare il siero con una pipetta. Il siero ricavato
corrisponde a circa il 30 % del sangue totale prelevato.In particolare, per la determinazione
di parametri a rischio di emolisi (cfr. tabella al paragrafo 2.2, pag. 12), occorre separare
il siero completamente dal coagulo ematico.
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2.2 Istruzioni generali sul prelievo e conservazione dei campioni
Sangue intero
Si sconsiglia la spedizione di sangue intero dato l'alto rischio di emolisi durante il
trasporto, con conseguente falsificazione di vari parametri analitici. In particolare, il
glucosio ematico viene degradato quasi del tutto, dal momento che il metabolismo
delle cellule ematiche non viene interrotto.
Sangue EDTA
Per la determinazione del quadro eritrocitario, leucocitario e piastrinico e del gruppo
sanguigno, ma anche per analisi PCR, è necessario rendere il sangue non coagulabile
tramite l'uso di EDTA. Il sangue EDTA va conservato in frigorifero fino al momento della
spedizione. A causa della conservazione si può verificare un aumento dei valori MCV
ed ematocrito.
Strisci ematici
Nel sangue, già 4 - 6 ore dopo il prelievo, ha luogo un invecchiamento cellulare. Per una
corretta interpretazione della conta leucocitaria è quindi importante inviare insieme al
sangue anche uno striscio ematico eseguito almeno entro due ore dal prelievo, utilizzando
il sangue intero prima che sia stato messo a contatto con l'anticoagulante.
Lo striscio ematico è indispensabile anche per il rilievo di parassiti ematici e di batteri
emotropi.
Tecnica di preparazione dello striscio
Istruzioni per la corretta preparazione
di uno striscio ematico
Angolo di inclinazione:
30° - 45°
2 Istruzioni di carattere generale
• Pipettare 1 goccia di sangue sull'estremità destra di un
vetrino portaoggetto.
• Appoggiare un secondo vetrino (p.es. vetrino coprioggetto
o vetrino con bordi levigati) sul vetrino portaoggetto
secondo un angolo di 45° e metterlo a contatto con la
goccia di sangue.
• Grazie alla forza capillare il sangue si distribuisce sul
bordo del secondo vetrino.
• Far slittare rapidamente il secondo vetrino verso sinistra
lungo il vetrino portaoggetto secondo un angolo di
30° - 45°.
• Lo striscio deve apparire regolare e senza soluzioni di
continuità, distribuito su 2/3 della lunghezza del vetrino e
risultare più sottile sulle sue parti terminali.
• Lasciare asciugare lo striscio all'aria (non utlizzare fissanti
né coloranti).
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