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2 Istruzioni di carattere generale
2.4 Istruzioni di carattere generale per le analisi di biologia molecolare (PCR)
Materiale da analizzare
Per la PCR si raccomandano campioni in cui si suppone che l'agente patogeno sia contenuto
in quantità sufficiente. Occorre pertanto, prima del prelievo, appurare:
- se l'animale si trovi o meno ancora nella fase viremica/batteriemica
- se l'agente patogeno abbia già raggiunto o meno il suo organo bersaglio e, in caso
affermativo, a seconda della sintomatologia, appurare quale sia il luogo più probabile in
cui risiede l'agente patogeno
- se esista un organo in cui l'agente risiede anche in fasi di latenza, al di fuori delle fasi
acute della malattia (come ad es. i leucociti per l'EHV-1).
Materiali per la ricerca di agenti patogeni tramite PCR
- Tamponi:
Per il prelievo di tamponi utilizzare tamponi sterili e asciutti; inviarli al laboratorio senza
terreno di trasporto in una provetta senza anticoagulante. Attenzione: questi campioni non
sono idonei per un esame batteriologico!
In caso di richiesta contemporanea di esame batteriologico e di esame tramite biologia
molecolare, prelevare ed inviare 2 tamponi separati.
- Liquidi biologici:
(sinovia, liquor, puntato delle cavità corporee, umore acqueo, urina ecc.):
Spedire in provette sterili e senza anticoagulante. In base ai parametri richiesti, sono
necessari 0,5- 2 ml di materiale. Per i campioni di urina si richiedono 5 ml. Se si è sicuri
che il campione arriverà al laboratorio non più tardi di due giorni dopo il prelievo, allora il
campione va conservato ad una temperatura dai +2° C ai +8°C e inviato senza congelarlo. Se
invece non si può escludere che il campione arrivi più tardi, allora occorre congelarlo e
inviarlo congelato senza interruzione della catena del freddo (utilizzando p.es. i contenitori
per materiale congelato). Indicare chiaramente sul modulo di richiesta esami che si tratta
di un campione congelato.
Una volta scongelato, evitare assolutamente di ricongelare il campione.
Per il rilievo di organismi intracellulari (p.es. Listeria) si dovrebbe tuttavia evitare il congelamento
del campione, mantenendolo quindi ad una temperatura dai +2° C ai +8° C.
- Prelievi bioptici, parti di organi, materiale abortivo:
Spedire in una provetta sterile senza anticoagulante, che contenga una quantità di soluzione
isotonica salina sterile sufficiente a coprire il campione. Se non siete sicuri che il campione
arrivi al laboratorio non più tardi di due giorni dopo il prelievo, inviate il materiale congelato
senza aggiunta di NaCl e senza interruzione della catena del freddo. Indicare chiaramente
sul modulo di richiesta che si tratta di un campione congelato.
Evitare uno scongelamento ed un ulteriore congelamento.
(Attenzione: gli esami su campioni tissutali richiedono un giorno di esecuzione in più).
- Sangue EDTA, sangue citrato:
La quantità di campione varia in base al tipo di esame ed eventualmente anche in base alla
fase della malattia. Non inviate in nessun caso campioni congelati. Non inviate sangue con
eparina!
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2.4 Istruzioni di carattere generale per le analisi di biologia molecolare (PCR)
- Feci:
Spedire in provette sterili senza anticoagulante. Di solito sono sufficienti 2 g di materiale.
Materiali per i test genetici con diagnostica molecolare (malattie ereditarie, test di paternità,
DNA-Fingerprinting)
Il materiale standard per gli esami genetici di malattie ereditarie è costituito da 0,5-2 ml di
sangue EDTA o, in alcuni casi, da un tampone della mucosa della guancia.
I tempi di trasporto non costituiscono un fattore critico per l'attendibilità dell'esito.
Il materiale standard per test del DNA e test di paternità è costituito da sangue EDTA
(almeno 0,5 ml) o da un tampone prelevato dalla mucosa della guancia.
È possibile scaricare il modulo di richiesta specifico per la diagnostica molecolare dal sito
www.idexx.it.
Indicazioni per il prelievo di tamponi dalla mucosa orale
2 Istruzioni di carattere generale
1. Prima del prelievo il paziente non dovrebbe aver assunto né cibo né bevande (ad eccezione
dell'acqua) da almeno 30 minuti.
2. Con un tampone sterile (meglio ancora con un "Cytobrush") strofinare vigorosamente
entrambe le guance interne avanti e indietro per almeno 10 volte. Durante la procedura far
roteare il tampone su se stesso.
3. Identificare chiaramente (dati del proprietario) il contenitore protettivo, per evitare possibili
scambi di campione!
4. Lasciar asciugare il tampone all'aria a temperatura ambiente per almeno 1- 2 minuti,
lasciando il tampone appoggiato al tavolo, dopo averlo spinto per alcuni centimetri nel
contenitore protettivo.
5. Dopo l'asciugatura spingere il tampone in fondo al contenitore protettivo.
6. Tenere quindi il campione in ambiente fresco (5- 8° C) e asciutto o inviare immediatamente
al laboratorio.
Non toccate in nessun caso il tampone, in quanto il contatto con materiale estraneo potrebbe
falsare l'esito o rendere impossibile la valutazione.
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