verzeichnisse - ArchiMeD - Johannes Gutenberg-Universität Mainz

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5 Ergebnisse
5.11.2 Lokalisationsanalyse
NIH-3T3-Zellen wurden für 2, 4, 8, 12 und 24 h in Stimulationsmedium kultiviert (3.7).
Mittels dieser stimulierten Zellen sollte untersucht werden, ob eine Translokation des
La/SS-B-Proteins aus dem Kern stattfand. Als Kontrollen wurden NIH-3T3-Zellen in
Kulturmedium (3.7) zum Zeitpunkt des Versuchsbeginns (0 h) und für 24 h kultiviert. Diese
Zellen sollten die typische, nukleäre Färbung zeigen.
Die Zellen wurden nach ihrer jeweiligen Inkubationszeit in Methanol/EGTA fixiert (4.32)
und mit immunzytochemischen Färbungen (4.32) analysiert. Der Nachweis der endogenen,
murinen La/SS-B-Proteine erfolgte mit dem mAK 5B9 (3.12) und einem mit dem
Fluoreszenzfarbstoff Cy3 markierten anti-Maus-AK (3.13). Laborerfahrungen zufolge konnten
Kreuzreaktivitäten zwischen den AK ausgeschlossen werden. Die Auswertung der hergestellten
Präparate erolgte durch Epifluoreszenz-Mikroskopie (4.34). Die Immunfluoreszenzfärbungen
sind in Abb. 23 dargestellt.
Abb. 23: Immunzytochemische Fluoreszenzfärbung von NIH-3T3-Zellen nach Stimulation mit GSNO
0) Kulturmedium bei 0 h; 1) Stimulationsmedium für 2 h; 2) Stimulationsmedium für 4 h; 3) Stimulationsmedium für 8 h;
4) Stimulationsmedium für 12 h; 5) Stimulationsmedium für 24 h; 6) Kulturmedium für 24 h
Die Zellen wurden bei 400x Vergrößerung dokumentiert.